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探究影响酶活性条件实验中鉴定试剂适用 　　在人教版高中《生物》(旧教材)必修第一册第三章“生物的新陈代谢”第一节“新陈代谢与酶”的教学中,教材安排了两个学生探究实验:“比较过氧化氢酶和Fe3+的催化效率”和“探索淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用”。这两个有关“酶的高效性、专一性”的探究实验,为学生提供了较为规范的探究性学习活动,是学生学习生物学探究实验方案设计的起始课。在高考备考及考试过程中,也经常以此为基石,来考察学生的实验探究能力。但是教材中的两个实验都给出了材料用具和实验步骤,学生只要按其步骤来实验就行了,其探究性不够强。因此,在这两个实验的基础上,我校利用午间实验室开放时间,增加实验“探索影响酶活性的条件”,组织学生独立性探究,更好的体现了开展探究活动的意义,落实了课改理念。 　　在学生探究“PH对酶活性的影响”及“温度对酶活性的影响”实验过程中,对于实验的操作步骤、鉴定试剂的使用及其结果都出现了不同与疑问。对于操作步骤的科学性,通过分析,学生很容易就明白并掌握了设计原则。但是,对于实验中鉴定试剂的使用及其结果,则稀里糊涂,理解的不好,疑问颇多。于是,我们引导学生进一步对两个实验中鉴定试剂的 　　适用性进行了如下探究。 　　1 探究“PH对酶活性的影响”实验 　　1.1 使用碘液作为鉴定试剂 　　1.1.1实验原理淀粉遇碘形成蓝紫色复合物。淀粉酶可使淀粉逐步水解为麦芽糖和葡萄糖,麦芽糖和葡萄糖遇碘不显色。【1】酶的催化作用需要适宜的PH,过酸、过碱都能使酶的分子结构遭到破坏而失去活性。【2】 　　1.1.2 实验过程及结果 见表1 　　1.1.3 问题的提出在3号试管中滴加碘液,甚至加许多滴,液面上蓝色一闪即逝,最终完全不显色。为什么没有出现预期的结果?通过讨论分析,最有可能是碘液与NaOH溶液发生了反应。碘液的成分是碘―碘化钾溶液,单质碘会与NaOH发生反应,没有了单质碘就不能鉴定出淀粉的存在。碘液还适合作鉴定试剂吗? 　　1.1.4 进一步探究如果碘液与NaOH溶液发生反应,那么加入足量的碘液,将NaOH反应完,再有多余的碘液就应该可以鉴定出淀粉的存在。如果稀释NaOH溶液到一定浓度,用少量碘液就可鉴定出淀粉了。在这个思路的指导下,同学们配制了一系列不同浓度的NaOH溶液进行探究,结果见表2。 　　1.1.5 实验结论 　　结论1:在碱性环境中,碘液的确是与NaOH溶液发生了反应(化学方程式:3I2+6OH-=5I-+IO3-+3H2O)。NaOH溶液浓度越低,所用碘液越少,最终在碘液足量时,溶液变蓝色。 　　结论2:浓度在0.2%以上的NaOH溶液,可使淀粉酶完全失活,浓度为0.1%的NaOH溶液,并不能使淀粉酶完全失活。因此本实验所用的NaOH溶液浓度应在0.2%以上。 　　结论3:在0.2%NaOH溶液中仍需滴加20滴碘液才能鉴定出淀粉的存在,说明该试剂不适用于碱性环境。因此,用碘液作为鉴定试剂是不合适的。 　　1.2 使用斐林试剂作为鉴定试剂 　　1.2.1 实验原理斐林试剂能够与还原糖发生氧化还原反应,生成砖红色氧化亚铜沉淀。【3】淀粉在淀粉酶的催化作用下能水解成麦芽糖、葡萄糖等还原糖。酶的催化作用需要适宜的PH,过酸、过碱都能使酶的分子结构遭到破坏而失去活性。 　　1.2.2 实验过程及结果 见表3 　　1.2.3 问题的提出实验结果是符合预期的。但在前一个实验结果的启发下,有同学认为,在加入5%HcL溶液的2号试管中,斐林试剂(Cu(OH)2)会不会与HcL反应,即便有还原糖存在,也是无法鉴定出来的?是淀粉酶失去活性,没有还原糖产生,还是Cu(OH)2与HcL发生反应,无法鉴定出还原糖? 　　1.2.4 进一步探究细心的同学发现,在2号试管中,虽然加入了5%HcL溶液1ml,但是加入斐林试剂后仍有淡蓝色絮状沉淀,说明仍有Cu(OH)2存在,是可以鉴定出还原糖的。但同学们并不满足于对现象结果的解释,而是又设计了如下实验,见表4。 　　1.2.5 实验结论在加入5%HcL溶液的试管中,斐林试剂确实可以鉴定出还原糖的存在。因此,斐林试剂可以作为本实验的鉴定试剂。 　　2 探究“温度对酶活性的影响”实验 　　2.1 使用碘液作为鉴定试剂 　　2.1.1 实验原理淀粉遇碘形成蓝紫色复合物。淀粉酶可使淀粉逐步水解为麦芽糖和葡萄糖,麦芽糖和葡萄糖遇碘不显色。酶的催化作用需要适宜的温度,温度过高能使酶的分子结构遭到破坏而失去活性,温度过低会强烈抑制酶活性。 　　2.1.2 实验过程及结果 见表5。 　　2.1.3 实验结论碘液可以作为本实验的鉴定试剂。 　　2.2 使用斐林试剂作为鉴定试剂 　　2.2.1 实验原理斐林试剂能够与还原糖发生氧化还原反应,生成砖红色氧化亚铜沉