上皮性卵巢癌中HOST2 lncRNA表达及临床意义.docVIP

上皮性卵巢癌中HOST2 lncRNA的表达及临床意义 　　【摘要】 目的：检测HOST2 lncRNA在上皮性卵巢组织的表达水平，并分析其临床意义。方法：利用实时荧光定量PCR方法检测HOST2 lncRNA在上皮性卵巢癌、上皮性交界性瘤和上皮性正常卵巢组织的表达水平，分析HOST2 lncRNA在不同上皮性卵巢组织表达差异的临床意义。结果：HOST2 lncRNA在上皮性卵巢癌组织和上皮性交界性瘤表达量明显高于上皮性正常卵巢组织的表达，差异均有统计学意义（P0.05）。HOST2 lncRNA在不同临床分期的上皮性卵巢癌中表达量无明显差异（P0.05）。结论：在上皮性卵巢癌和交界性卵巢瘤中HOST2 lncRNA均有表达，可作为上皮性卵巢癌早期诊断的一个分子诊断标志物。 　　【关键词】 HOST2 lncRNA； 实时荧光定量PCR； 卵巢癌 　　近年来卵巢癌的发病率呈上升趋势，而且卵巢癌早期起病隐匿，无明显临床表现，其确诊时，多为晚期，生存率不到30%。在卵巢癌I期中，明确诊断的患者仅占25%；而早期患者经常规治疗后，5年生存率可达90%[1-3]。目前常用于卵巢癌诊断标志物为血清Ca125和He4，而近年来长链非编码RNA应用于卵巢癌诊断和治疗逐渐增多[4-8]。HOST2 lncRNA（ovarian cancer-specific transcripts 2 lncRNA，HOST2 lncRNA）是Rangel等2003年在卵巢癌细胞株和原位癌中高表达的lncRNA。HOST2 lncRNA在卵巢癌中高表达，提示HOST2对卵巢癌诊断有一定临床应用价值[9]。本研究采用PCR方法检测HOST2在上皮性卵巢癌、上皮性交界性瘤和上皮性正常卵巢组织的表达水平，初步探讨HOST2 lncRNA在上皮性卵巢癌的早期诊断价值。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 标本来源 正常卵巢组织组（n=21）（上皮性卵巢囊肿21例）、上皮性卵巢交界性肿瘤组（n=23）（浆液性9例，黏液性6例，卵巢内膜样瘤8例）和上皮性卵巢癌组（n=21）（浆液性12例，粘液性5例，卵巢内膜样4例；Ⅰ～Ⅱ期11例，Ⅲ～Ⅳ期10例），组织标本收自于本院接受手术的患者，术前均未接受放化疗。术中切取卵巢部分组织立即置液氮中，用于提取RNA。部分组织HE染色后用于病理诊断。所有涉及人体标本的研究均事先获得本院伦理委员会的批准。 　　1.1.2 主要试剂和仪器 总RNA抽提试剂盒、逆转录试剂盒、PCR扩增试剂SYBR GreenⅡ均购自大连TaKaRa公司；磷酸盐缓冲液（PBS）为本院自配。荧光定量PCR扩增仪gene cycle TM Bio-Rad（美国）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 总RNA提取和cDNA合成 组织总RNA提取采用液氮研磨法，采用Trizol试剂提取总RNA。提取总RNA后，经真空干燥后溶解于DEPC水中。测定A260 nm/A280 nm比值及RNA浓度后，立即进行cDNA合成。cDNA合成是根据RNA的浓度，分别取一定量的RNA模板样品，依次加入逆转录试剂，总反应体积60μL，具体操作过程按逆转录试剂盒说明书进行。 　　1.2.2 引物设计 根据HOST2 lncRNA全长基因序列，利用Primer Premier 5.0设计HOST2 lncRNA特异性的引物，参考文献设计内参引物，引物序列见表1。引物由上海英俊（Invitrogen）公司合成。 　　表1 HOST2 lncRNA基因和β-actin基因的引物序列 　　基因 类别 序列 　　HOST2 lncRNA 上游引物 5 CTCAAATCAATCACGACCCT3 　　下游引物 5 AATGTAGCAGGACGAGCC 3 　　β-actin 上游引物 5 GATGACCCAGATCATGTTTG 3 　　下游引物 5 AGGGCATACCCCTCGTAGAT 3 　　1.2.3 PCR扩增 扩增体系：目的基因与内参基因反应体系为25 μL，体系中各成分的量见表2。扩增条件：预变性95 ℃，5 min；变性95 ℃，30 s；延伸52 ℃，30 s；退火72 ℃，1 min，30个循环；72 ℃复性5 min。进行cDNA PCR扩增。目的基因和内参基因的扩增在同时完成，检测样本的同时制备目的基因和内参基因的双标准曲线，同时实验设阴阳性和空白对照。F值计算公式：F=目的基因拷贝数/内参基因拷贝数。 　　表2 PCR反应体系 　　HOST2 lncRNA 　　β-actin 　　组分名称 加入量（μL） 组分名称 加入量（μL） 　　正向引物 0.5 正向引物 0.5 　　反向引物 0.5 反向引物 0.