丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠心肌cjuncfosmRNA影响.docVIP

丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠心肌c-jun、c-fosmRNA的影响 　　摘要：目的丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠心肌c－iun、c-fosmRNA的影响。方法本实验设计三种实验模型，即力竭游泳运动模型、递增负荷游泳训练模型、BSO排空GSH模型，研究三种模型对大鼠心肌中原癌基因c-jun和c-fos mRNA表达的影响，结果发现：力竭运动后训练力竭组(TE)、注射BSO力竭组(BE)、对照力竭组(cE)的大鼠心肌中c-jun mRNA表达量与相对应的训练安静组(TR)、注射BSO(BR)、对照安静组(cR)均增加，其中力竭运动后BSO力竭组的c―jun mRNA表达量高于训练力竭组，c－jun mRNA表达量训练力竭组高于对照安静组。训练组、注射BSO组、对照组进行力竭游泳运动后，大鼠心肌中c-los安静组mRNA表达量增加。BSO力竭组的c-fos mRNA表达量高于对照力竭组。训练力竭组与对照力竭组相比c-fos mRNA表达量，没有明显变化。由上述实验结论得出，长时间力竭运动机体活性氧产生增加，c．jun mRNA和c-fos mRNA的表达量增加，进而激活转录因子AP-1。 　　关键词：力竭运动、递增负荷运动训练、谷胱甘肽、AP-1、c-fos、c―jun 　　中图分类号：G804．7 文献标识码：A 文章编号：1007―3612(2007)02―0200-03 　　本文依据文献推测，长时间力竭运动机体代谢旺盛的组织心肌活性氧产生增加，当其产生的量超出其还原能力时，势必对细胞的氧化还原状态产生影响，激活氧化还原敏感的转录因子AP一1的表达。本部分实验的研究目的：根据目前的大量的细胞实验研究结果提出种假设：长时间力竭运动产生的氧化应激有可能对原癌基因c―jun和c―fos的mRNA表达产生影响，进而激活转录因子AP一1，诱导某些特殊基因的转录。 　　 　　1　研究对象与方向 　　 　　1．1研究对象 实验选用纯系雄性Sprague―Dawley(SD)大鼠50只，体重200～250g，由上海医科大学实验动物中心提供，常规条件下采用分笼饲养，每笼5只，饲料选用国家标准啮齿类动物混合饲料喂养。室温控制在22℃±2℃，自由饮水进食。 　　1．2试剂与仪器ELISA检测大鼠TNF－a试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)异硫氰酸胍(Gibco公司)AMV逆转录酶(Promega公司)dNTPs(Promega公司)Oligo(dT)(Promega公司)Taq酶(华美公司)引物(赛百胜公司)DNA ladder(MBI公司)核酸蛋白分析仪(Beckman公司)核酸蛋白成像仪(Phar．macia公司)电泳仪及水平电泳槽(Bio―Rad公司)PCR仪(PE公司) 　　1．3 PCR引物设计 　　 　　2 实验方法 　　 　　2．1 实验动物分组、训练与处理 本实验模型参照Vebditti(1997)大鼠游泳训练模型。大鼠自购入后适应环境两天，然后在150 cm×60 cm×60 cm的玻璃水池中进行无负重游泳适应性训练一周，(水深45、水温维持在(33±2)℃)，15 min／次、5次／周。随机分成6组，即对照组(cR)、力竭组(CE)、训练组(TR)、训练力竭组(TE)、注射BSO组(BR)、注射BSO力竭组(BE)。 　　训练组进行10周渐增游泳训练，5次／周。第一周15min／次，第二周50 min／次，以后每周增加10 min直至第6周。第6～10周保持90 min／周。安静组和注射BSO组的大鼠常规条件下饲养。在游泳训练的最后8d，注射BSO组的大鼠开始注射BSO(L―Buthionine―Sulfoximine，丁胱亚磺酰亚胺)，一种谷氨酰半胱氨酸合酶(GCS)的抑制剂，采用腹腔注射。BSO的用量为：6 mmol／kg体重，用O．8～1．0 mL的生理盐水溶解，每天分别在8：00 AM～5：00 PM注射两次，对照组和训练组注射等量的生理盐水，共8d。 　　在最后一次训练后24h，先尾静脉取血，然后立即断头处死TR组的大鼠。在最后一次注药后30 min，大鼠尾静脉取血后，断头处死BR组的大鼠，安静状态，先尾静脉采血后断头处死CR组的大鼠。在力竭游泳后尾静脉采血，然后断头处死CE、TE、BE组的大鼠。处死后立即取大鼠的心肌放入液氮中保存。 　　2．2大鼠心肌的c―JunmRNA、c―FosmRNA的半定量测定 　　2．2．1 组织总RNA抽提及逆转录反应 　　2．2．2 采用紫外分光光度法，测定RNA样品在波长260 Flln和280 nm的紫外吸收值 根据10D260相当于40μg／mL RNA确定RNA的量，根据OD260／OD280光密度值定量判定RNA样品的纯度