一株海南土著荚膜红细菌培养特性.docVIP

一株海南土著荚膜红细菌的培养特性 　　摘 要：针对筛选到的一株海南土著的高活性荚膜红细菌（Rhodobacter capsulatus）菌株QH03，开展其最适培养条件研究。结果显示：其最适碳源为乙酸钠和酵母膏，最适氮源为氯化铵和硫酸铵，适宜光照强度为3 000 ～8 000 lx，最适温度为30～35 ℃，最适初始pH为7.0～7.5，最适盐度为10‰～30‰。 　　关键词：光合细菌；荚膜红细菌（Rhodobacter capsulatus）；培养条件 　　光合细菌是最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，可具有多种功能，包括固氮、脱氮、固碳、硫化物氧化等，与氮、磷、硫循环具有密切的关系，在自然界的净化过程中担当着十分重要的角色。因此，人们利用光合细菌的生理和生态特点，将其应用于废水治理当中，取得了显著的效果。研究表明光合细菌在水产养殖中的应用效果也十分显著[1]。光合细菌不但能作为净水剂改善池塘水质，还因其含有丰富营养物质以及生物活性物质辅酶Q，可作为鱼虾贝幼体及轮虫等动物性生物饵料的饵料，以及水产动物的饲料添加剂[1]。光合细菌的使用可显著提高水产养殖动物的生长性能、存活率、免疫功能和抗病能力，从而提高养殖产量[2-4]。光合细菌产品作为一种无毒害副作用和药物残留的微生态制剂，在当前保护环境、生态养殖及食品安全等的社会导向下，十分值得进一步的推广应用。 　　目前应用于水产养殖的光合细菌产品繁多，但产品质量参差不齐，其中不乏添加色素、活力低等的伪劣产品。另一方面，海南地处热带地区，气候条件特殊，但针对海南土著光合细菌的研究尚未见报道。因此，作者从海南养殖池塘中筛选海南土著的光合细菌菌种，以期研发能更好地适用于海南地区水产养殖的高效光合细菌产品。从大量分离的菌株中，筛选了一株生长速度快、菌液鲜红的菌株，编号为QH03，经鉴定该菌株为荚膜红细菌（Rhodobacter capsulatus）。为进一步研究该菌株的应用价值，针对该菌株开展了适宜碳源、氮源、光照度、温度、初始pH以及盐度等培养特性研究。 　　1 材料和方法 　　1.1 试验菌株 　　本试验用的菌株由中国热带农业科学院热带生物技术研究所从海南高产对虾土塘的养殖水体中分离获得，经鉴定为荚膜红细菌Rhodobacter capsulatus（菌株编号QH03）。 　　1.2 基础培养基 　　每1 L液体培养基中，含有以下成分：CH3COONa 2 g、NH4Cl 1 g、MgSO4?7H2O 0.2 g、KH2PO4 0.5 g、K2HPO4 0.3 g、NaCl 0.1 g、CaCl2 50 mg、MnSO4?H2O 2.5 mg、生长素贮液（生长素1 mg、烟酸100 μg、对氨基苯甲酸10 mg、维生素B1 100 mg，蒸馏水1 L）10 mL，调节pH至7.0，高压灭菌。 　　1.3 生长测定 　　用紫外可见分光光度计测定培养液在660 nm的OD值。 　　1.4 培养特性研究 　　1.4.1 碳源 在基础培养基中，以不同的碳源替代CH3COONa，配制成含有不同碳源的培养基，将活化的菌种以20%接种到已灭菌的培养基中，于温度30 ℃、光照强度3 000 lx下培养96 h，取培养液测定OD660，根据菌株生长情况判断其对不同碳源的利用情况。实验设置3个平行。 　　1.4.2 氮源 在基础培养基中，以不同的氮源替代NH4Cl，配制成含有不同氮源的培养基，将活化的菌种以20%接种到已灭菌的培养基中，于温度30 ℃、光照强度3 000 lx下培养96 h，取培养液测定OD660，根据菌株生长情况判断其对不同氮源的利用情况。实验设置3个平行。 　　1.4.3 光照强度 将活化的菌种以20%接种到已灭菌的基础培养基，置于不同的光照强度下培养：1 000 、2 000、3 000、4 000、6 000和8 000 lx，温度30 ℃，培养96 h，取培养液测定OD660。实验设置3个平行。 　　1.4.4 温度 将活化的菌种以20%接种到已灭菌的基础培养基，置于不同的温度下培养：15、20、25、30、35和40 ℃，光照度3 000 lx，培养96 h，取培养液?y定OD660。实验设置3个平行。 　　1.4.5 初始pH值 将基础培养基调节为不同的pH值：6.0、6.5、7.0、7.5、8.0和8.5，将活化的菌种以20%接种，于温度30 ℃、光照强度3 000 lx下培养96 h，取培养液测定OD660。实验设置3个平行。 　　1.4.6 盐度 将海水进行过滤，以蒸馏水进行稀释配制不同盐度：0、5‰、10‰、15‰、20‰、25‰和30‰。以不同盐度的稀释海水配制培养基（去除NaCl），将活化的菌种以20%接种，于温度30