亚麻捕食线虫真菌脱胶技术试验研究.docVIP

亚麻捕食线虫真菌脱胶技术的试验研究 　　摘 要：试验对亚麻脱胶效果最好的捕食线虫真菌进行筛选，并就影响真菌脱胶的外界因子（加菌菌龄、加菌量）进行了初步研究，结果表明：LXT―3具有产果胶酶的能力，在温度为27℃，pH为6的条件下，实现最佳脱胶效果的外界条件是加菌菌龄96h、加菌量2mL。 　　关键词：亚麻脱胶；食线虫真菌；果胶酶 　　 　　 　　亚麻纤维是纺织工业中的重要原料，亚麻可纺纤维以纤维束的形式存在于亚麻韧皮内，纤维束与纤维束之间、韧皮与木质部之间都是靠果胶连接[1]。由亚麻原茎去除表皮、皮层、韧皮薄壁组织等胶杂成分，获得亚麻干茎的工艺过程称为亚麻脱胶[2]。传统的亚麻脱胶方法存在着出麻率低、脱胶周期长、沤麻效果不稳定等弊端。亚麻生物脱胶（无论是加菌脱胶还是酶法脱胶）具有专一性强、作用条件温和、纤维产量高、加工质量好、环境污染轻和工艺简单易行等特点，其广阔开发前景是无庸置疑的。尤其加菌脱胶的生产成本低廉，比酶法脱胶更接近生产应用水平。有人在微生物脱胶方面做了很多研究，主要针对于厌氧的果胶酶产生菌，而在工业化的生产实践中厌氧培养有提高生产成本、加大技术难度等问题，不利于在生产实践中推广应用[3]。为了克服以上方法的弊端，进行高效脱胶菌种的筛选与加菌技术的研究显得尤为重要。本试验通过模拟亚麻沤制过程及Fried法，筛选出脱胶效果好的菌株及适宜的脱胶条件，可以为生物脱胶在生产实践中的推广应用起到积极作用。 　　1、实验部分 　　1.1实验材料 　　供试原茎为产自云南武定的亚麻；沤麻水取自昆明翠湖水、昆明理工大校内池塘水、自来水；出发菌株LXT云南大学生物实验室的提供；其余试剂为国产分析纯。 　　1.2实验方法 　　脱胶程度的判断方法为Fried法（弗里曼氏诊断法）：从沤制好的亚麻捆中抽取沤麻茎3~4根，放入标有相应符号的试管，再向试管中倒入等量、能淹没亚麻的沸水（试管的三分之二），塞上试管塞，用最大的力气摁着试管塞（防止沸水漏出）去甩试管10秒钟。观察甩过试管中的亚麻纤维分散程度。深度脱胶的麻，经震荡胶质脱落，分散纤维显露。目测评定纤维分离的记分：0级（完全不分散）、1级（部分分散）、2级（基本分散）、3级（分散良好）[2]。 　　1.3实验内容 　　1.3.1菌种培养 　　制作PDA平板培养基，在无菌操作条件下，将4种出发菌株（LXT-1、LXT-3、LXT-4、L1421）分别接种到培养基中，并放入恒温培养箱中进行培养，为后续试验提供所需的足够菌株。 　　1.3.2菌种筛选 　　将4种出发菌株接种到以果胶为唯一碳源的培养基，进行培养并观察水解圈现象（出现水解圈现象说明菌株能以这种唯一碳源―果胶“为食”，即具有分解果胶的能力）。并将筛选出的菌株接种到pH分别为4、5、6、7、8、9的培养基中，观察其长势，确定该菌株最适的pH条件。 　　1.3.3天然水沤麻 　　将亚麻原茎剪成6～8cm长，扎成小捆放入500mL的三角瓶中。分别以翠湖水、学校池塘水、自来水和加酶制剂的灭菌水作为沤麻水，以灭菌亚麻和未曾进行灭菌处理的亚麻为原料进行脱胶对比实验，在浴比为1：15，27±1℃条件下恒温沤制，做3份平行样。 　　1.3.4加菌菌龄对亚麻脱胶效果的影响 　　以加入筛选出的菌株的灭菌水为沤麻水，加菌菌龄梯度分别为72h、96h、120h、144h，在浴比为1：15，27±1℃，pH为6的条件下恒温沤制，每个梯度做3份平行样，做脱胶对比实验。 　　1.3.5加菌量对亚麻脱胶效果的影响 　　以加入筛选出的菌株的灭菌水为沤麻水，加菌量（在培养好的平板中用移液枪注入8mL灭菌水，用玻璃刮子将菌丝刮下后得到的菌液）梯度分别为1mL、2mL、4mL、8mL，在浴比为1：15，27±1℃，pH为6的条件下恒温沤制，每个梯度做3份平行样，做脱胶对比实验。 　　2、结果与讨论 　　2.1菌种筛选及其适宜pH条件 　　菌种筛选结果见表1。LXT―3最适pH条件实验结果见表2。 　　 　　由表3可知，在沤麻水质相同的情况下，亚麻不灭菌的脱胶效果要比亚麻灭菌的脱胶效果好。这是因为亚麻不灭菌的沤麻过程中起脱胶作用的是亚麻原茎上的和沤麻水中的微生物，而亚麻灭菌的沤麻过程中起作用的只有沤麻水中的微生物，作用微生物的种类和数量上存在的这种差别是脱胶效果有差别的主要原因。 　　在亚麻不灭菌的条件下，学校池塘水最有利于亚麻的脱胶。这是由于沤麻对水质是有一定要求的，一般以软水即河水、塘水为宜，因为天然软水中含有大量有机物，可用做细菌的养料，含石灰质或其它矿物质较多的硬水，会抑制细菌的繁殖造成脱胶不匀，纤维色泽不良。 　　在亚麻进行灭菌的条件下，灭菌加酶沤麻的脱胶效果最好，可能是因为所加的酶制剂的专一性强，催化效率高，