原发性胆汁性肝硬化免疫发病机制研究进展.docVIP

原发性胆汁性肝硬化免疫发病机制研究进展 　　[摘要] 目的 探究原发性胆汁性肝硬化（PBC）免疫发病机制。方法 选取该院2011年3月―2013年3月收治的100名PBC患者作为研究资料，根据他们病情的不同，分为PBC活动期组和PBC稳定期组，并选择同期的50名身体健康体检者作为对照组。抽取所有试验人员晨起空腹状态下的肘静脉血液，利用双色荧光标记技术，对所有血样中的CD4+CD25+T细胞亚群和CD4+CD28+T细胞亚群的变化情况，用流式细胞术进行观察和检测。结果 PBC活动期患者血液中的CD4+CD25+T细胞亚群含量比PBC稳定期患者和健康人群低（P0.05），而CD4+CD28+T细胞亚群含量比PBC稳定期患者和健康人群高（P0.05）；同时，PBC稳定期患者血液中的CD4+CD25+T细胞亚群含量比健康人群低（P0.05），而CD4+CD28+细胞亚群含量比健康人群高（P0.05）。结论 CD4+CD25+T含量在PBC患者血液中的减少，打破了效应T细胞亚群和调节性T细胞亚群之间的动态平衡关系，患者维持自身免疫应答的稳态遭到破坏，最终引发PBC病症。 　　[关键词] 原发性；胆汁性；肝硬化；免疫发病机制 　　[中图分类号] R57 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2015）01（b）-0088-02 　　原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis， PBC）是由于某种免疫介质传递不足，导致免疫调节功能紊乱发生免疫亢进的一种疾病，临床典型表现为瘙痒和疲劳。患者常见皮肤抓痕、肝脾体积增大、黄疸等症状，但并不是特异性症状。黄疸的症状通常出现在PBC的晚期阶段，但在早期PBC患者中也并不少见。根据临产的PBC病发量统计，PBC每年的发病率大约为万分之3.95，发病的患者大多数为女性（占83%左右），患者的平均年龄为（63.4±3.5）岁，临床主要表现为四肢乏力和皮肤瘙痒[2]。PBC的特异性诊断指标为血清AMAs呈阳性，一般确诊后平均存活年限为（15.6±1.8）年。虽然男性和女性PBC患者在血清学、组织学以及生物化学方面不存在本质差异，却在病症学方面有明显区别，男性PBC患者出现亚种并发症的可能性更高，肝癌和消化系统病变等并发症都较为常见。相关资料指出，随着PBC早期诊断技术的进步及熊去氧胆酸（ursodeoxycholic acid， UDCA）治疗方法在临床应用的逐渐推广，有效地提高3PBC的临床治疗效果，但是仍有部分患者治疗效果不理想，需接受肝移植手术。研究显示，自身免疫特征、遗传因素、外界环境是PBC发病机制中的重要诱因。该研究选取2011年3月―2013年3月该院收治的100例PBC患者作为研究对象，利用双色荧光标记技术对所有血样中的CD4+CD25+T细胞亚群和CD4+CD28+T细胞亚群的变化情况用流式细胞术进行观察和检测，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　该研究选取100例PBC患者作为对象根据他们病情的不同，分为PBC活动期组和PBC稳定期组，PBC活动期组患者65人，PBC稳定期患者35人。PBC活动期组中，男性20名，女性45名，年龄36～81岁，平均年龄（58.4±14.2）岁；PBC稳定期组中，男性9名，女性26名，年龄34～82岁，平均年龄（57.8±15.7）岁。这100名患者都符合2000年美国肝病学会制定的对PBC 的诊断指导建议，且都不存在其他可能干扰实验结果的肝脏疾病，如药物性、酒精性肝病患者；肝内或肝外胆道梗阻、肝肿瘤等。同时，选择同期的50名身体健康体检者作为对照组，对照组中男性20名，女性30名，年龄25～85岁，平均年龄（53.9±16.3）岁。 　　1.2 方法 　　实验要求所有参与实验人员在实验当日晨起后不得进食，然后抽取实验对象的手肘静脉血液作为样本，并加入新鲜肝素钠抗凝，然后将血样送检。然后，使用COULTER EPICS XL流式细胞仪检测送检的血样。标准单克隆荧光抗体包括：FITC-CD4、PE-CD25、PE-CD28以及溶血素。将适量的双色抗体（FITC-CD4/PE-CD25、FITC-CD4/PE-CD28）加入至送检的血样中，在避光、常温的条件下，孵育血样20 min，随后将2 mL左右的红细胞裂解溶液加入血样中，利用OptimaTMXPN超速离心机以1 200 r/min的速度进行5 min的离心操作，将离心后产生的上清液去除，加入2 mL左右的磷酸盐缓冲液，继续以1 000 r/min的速度进行5 min的离心操作，再次将离心后产生的上清液去除，对以上过程进行再一次重复操作，随后将500 μL磷酸盐缓冲液加入两次离心后的血样中，最后检测其结果。检测的过程中，