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姜黄素对肠癌细胞作用效果 　　摘要：目的：研究姜黄素对人类结肠癌Lovo细胞的作用效果。方法：使用不同浓度（0 μmol/L、5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L） 的姜黄素对2014年8月――2014年12月由中南大学提供结肠癌细胞株Lovo进行24 h的处理，并且用Real-time PCR来检测姜黄素对人类结肠癌细胞株血管内皮生长因子VEGF mRNA表达的作用效果，采用Western blot 来检测姜黄素对结肠癌细胞的VEGF蛋白表达的变化。结果：人类结肠癌Lovo细胞在经过姜黄素治疗24小时后，5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 的姜黄素的VEGF mRNA和蛋白表达都出现了显著降低，这和对照组相比具有明显的统计学差异（P 0.05）。结论：姜黄素能够降低人类结肠癌Lovo细胞VEGF的表达，并且对姜黄素的剂量有一定的依赖性，这是姜黄素抑制结肠癌Lovo细胞增殖和表达的有效方式之一。 　　关键词：姜黄素；肠癌细胞；作用 　　姜黄素是从姜科姜黄属植物提取出来的一种天然活性成分，其具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等多种药理作用，其还有较低的毒性，具有非常良好的临床应用潜力。姜黄素具有一定的抗肿瘤效应，这就引起了国内外的广泛关注。结肠癌是一种非常常见的恶性肿瘤，尽管近年来许多患者经过手术、化疗、放疗、免疫和其他综合治疗以后，治疗效果取得了一定的进展，但是其死亡率仍非常高。本次实验是采用2014年8月- 2014年2月由中南大学提供结肠癌Lovo细胞作为研究对象，并且对不同浓度的姜黄素对结肠癌Lovo细胞VEGF表达的影响进行观察，从多角度研究姜黄素对结肠癌细胞的作用效果，这样就能够为结肠癌临床治疗提供一些理论基础结肠癌，现报道如下。 　　1.资料和方法 　　1.1一般资料 　　人类结肠癌Lovo细胞是由中南大学肿瘤研究所提取出来的，实验中的姜黄素是从Sigma公司购买的，区3.684mg的姜黄素充分溶解在1毫升的DMSO溶液当中，得到最终的浓度为10 mmol/ L母液，在细胞培养基稀释到使用时所需的浓度。Trizol、逆转录试剂盒都是从大连宝生物公司提供的，引物也是由大连宝生物公司进行合成的。蛋白质提取液和ECL 发光试剂盒是从Pierce公司购买的，兔抗人VEGF多克隆抗体和羊抗兔二抗lgG都是从Santa Cruz公司购买的。 　　1.2细胞培养和处理 　　人类结肠癌Lovo细胞接种在含有10%的胎牛血清1640培养基当中，并且在37℃和5%的二氧化碳以及饱和湿度培养箱中进行培养，隔天需要更换液体，保持细胞对数生长期长，用0.25%胰蛋白酶进行消化传代。在对数期Lovo细胞进行分组，对照组是使用姜黄素0 μmol/L，加入等量DMSO，实验组为含有姜黄素5 μmol/L，10 μmol/L，20 μmol/L，40 μmol/L 组，在37℃和5%二氧化碳的环境下进行处理后，在饱和湿度中进行细胞培养24h。 　　1.3 Real-time PCR 　　采用Trizo1试剂一步法来提取细胞总RNA，利用紫外分光光度计来测定细胞的总RNA浓度，计算OD260/280，RNA的比值在1.8 ～ 2.0的标本能够进行反转录。总RNA需要按照说明书合成cDNA逆转录产品cDNA是用于Real-time-PCR进行扩增。VEGF的引物：5 端：5 端：5 -GGGGGATCCGCCTCCGAA-ACCATGAACTT -3 及3 端：5 -CCCGAATTCTCCTGGTGAGAGA-TCTGGTT-3，变性、退火温度分别为94℃和72℃，并且需要进行40个循环，并且根据样例CT值来计算样品中模板的数量。 　　1.4统计方法 　　使用SPSS13.0软件对数据进行分析，并且利用方差分析和t进行检验，P 0.05时具有明显的统计学差异性。 　　2.结果 　　2.1不同剂量姜黄素在人类结肠癌Lovo细胞表达的影响 　　分别使用Primer 3.0 软件设计VEGF和GAPDHmRNA的引物， 利用Real-time PCR来检测VEGF mRNA的表达效果，如表1所示。姜黄素5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 组与对照组进行比较，VEGF mRNA的表达出现了显著降低，具有明显的统计学差异性（P 0.05）。 　　2.2不同剂量姜黄素在人类结肠癌Lovo细胞VEGF蛋白表达的影响 　　不同剂量姜黄素对Lovo细胞进行处理，并且需要收集细胞的总蛋白质，利用Western Blot 对VEGF 蛋白的表达效果进行检测，姜黄素5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L