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USPIO标记小鼠调节性T细胞体外初步研究-外科学(器官移植)专业论文
独创性声明
本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包括任何其他 个人或集体已经发表或撰写的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体, 均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本文声明的法律结果由本人承担。
学位论文作者签名:
日期: 年 月 日
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本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即学校有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版,允许论文被查阅和借 阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索,可以采用影印、缩印或扫描复制手段保存和汇编本学位论文。
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日期: 年 月 日 日期: 年 月 日
目录
HYPERLINK \l _bookmark0 英文缩略词表???????????????????1
中文摘要?????????????????????2
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前言…………………………………………?…???…4-5 实验材料与方法 ………………………………???…5-11 结果………………………………………………………11-15 结论………………………………………………………15-17 讨论 …………………………………………………………17 参考文献…………………………………………………17-20 综述………………………………………………………21-34 致谢 …………………………………………………………35
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华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
英文缩略词表
英文缩写
英文名称
中文名称
SPIO
Superparamagnetic iron oxide
超顺磁性氧化铁
USPIO
Ultrasmall superparamagnetic iron oxide
超小超顺磁性氧化铁
MTT
Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium
bromide
噻唑蓝
MRI
Magnetic resonance imaging
核磁共振成像
Treg
Regulatory T cells
调节性 T 细胞
DMSA
Dimercaptosuccinic Acid
二巯基琥珀酸
PBS
Phosphate Buffered Solution
磷酸盐缓冲溶液
DMSO
Dimethyl Sulfoxide
二甲基亚砜
FCM
Flow Cytometry.
流式细胞术
华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文
USPIO 标记小鼠调节性 T 细胞体外初步研究
硕士研究生 余道武
导 师 陈忠华教授 华中科技大学同济医学院附属
同济医院器官移植研究所 教育部/卫生部器官移植重点实验室 摘要
目的 利用超小超顺磁性氧化铁(USPIO)核磁共振对比剂体外标记调节性 T
细胞,检测 USPIO 对比剂对调节性 T 细胞的生物学影响,从而为核磁共振成像
(MRI)在器官移植受者中监测回输体内的 USPIO 标记的调节性 T 细胞的分布 等提供依据。
方法 采用调节性 T 细胞(regulatory T cell,Treg)分选试剂盒分离纯化小鼠 自然 Treg。将分离出的小鼠脾脏淋巴细胞与浓度分别为 0.01、0.05、0.10、 0.15mg/ml 的二巯基琥珀酸(DMSA)包被的 USPIO 共孵育 3h,6h,12h,24h, 采用普鲁士蓝染色和原子吸收分光光度计法检测 USPIO 的淋巴细胞摄取率,并 用采用噻唑蓝(MTT)活细胞染色方法检测标记后的淋巴细胞的活性。筛选出 合适的 USPIO 浓度,以该浓度的 USPIO 标记分离纯化的 Treg。流式细胞仪检测
(FCM)USPIO 标记前后的 Treg 内 Foxp3 的表达状况。通过对 Treg 对淋巴细 胞增殖的抑制作用的检测来判断 Treg 的功能变化。MRI 扫描用琼脂凝胶固定的 USPIO 标记的细胞悬液,了解标记前后的细胞信号变化情况。
结果 Treg 能够摄取 USPIO,USPIO 的摄取量随 USPIO 的浓度改变而变化, USPIO 的浓度越大 Treg 摄取的量越大,反之亦然;USPIO 在一定浓度范围内, 对 Treg 生物学特性如细胞活性、细胞表型等无明显影响,仍能使 Treg 维持一定 的免疫调节功能。MRI 扫描图像显示 USPIO 标记的 Treg T2 加权相信号明显降 低。
结论 DMSA 包被的 USPIO 可以成功地在体外标记 Tre
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