TXNIP对胰岛β细胞衰老的影响及机制的初步研究-内科学专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 TXNIP Thioredoxin interacting protein 硫氧还蛋白相 互作用蛋白 P16ink4a Inhibitor of cyclin-dependent kinase 4a encoding the tumor duppressor protein p16 P16ink4a 基因 EZH2 Enhance of zeste homolog 2 增强 zeste 同源 2 TRX Thioredoxin, 硫氧还蛋白 MAPK Mitogen Activated Protein Kinase 丝裂酶原激活 蛋白激酶 ERK Extracellular signal-regulated protein kinases 细胞外信号调 节激酶 SA-β-gal senescence associated acidic-β-galactosidase 衰老相关-β-半 乳糖苷酶 DTT Dithiothreitol 二硫苏糖醇 MTT 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide 甲基四唑蓝 DMEM Dulbecco modified Eagle medium 杜尔伯科改良 伊格尔培养基 PMSF phenylrnethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 SDS Sodium Dodecylsulfate 十二烷基硫酸 钠 TEMED N,N,N,N-Tetramethylethylenediamine， N,N,N,N-四甲 基二乙胺 EDTA ethylenediaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸 1 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 ECL Enhanced chemiluminescence 增强化学发光 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应 PVDF Polyvinylidene Difluoride 聚偏二氟乙烯 BSA Bovine Serum Albumin 牛血清白蛋白 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 2 TXNIP 对胰岛β细胞衰老的影响及机制的初步研究 摘 要 目的：探讨 TXNIP 对胰岛 β 细胞衰老的影响及 TXNIP 可能参与的 影响衰老的信号通路，寻找潜在的胰岛 β 细胞老化的治疗靶点，为糖 尿病的防治提供新思路。 方法：小鼠 MIN6 细胞通过稳定转染方法构建 TXNIP 沉默（MIN6-KO） 及过表达(MIN6-OE）的细胞株，空载质粒（MIN6-GFP）为对照组。稳 定转染的细胞按常规方法进行培养，RT-PCR 及 western blot 检测不同 代数沉默及过表达 TXNIP 后 MIN6 细胞中 P16ink4a、EZH2，TRX 基因及蛋 白的改变，流式细 胞术检测细胞周期，衰老相关-β-半乳糖苷酶 染色 检测衰老细胞率，MTT 法 检测 细胞增殖，胰岛素还原法检测 TRX 活性。 进一步检测沉默 TXNIP 基因后高糖刺激下 P38MAPK 和 ERK1/2 及其磷酸 化的变化,抑制剂 PD169316、PD98059 抑制信号通路后，观察 P38MAPK、 ERK1/2 蛋白磷酸化的变化及 TXNIP、TRX、 P16ink4a、EZH2 的变化情况。 结果：在 MIN6 细胞中，随传代次数的增加 TXNIP 的表达增加 （P0.05）。过表达 TXNIP 后 P16ink4a 表达增加（P0.05），EZH2 表达 减少（P0.05），TRX 表达减少，活性降低（P0.05）；细胞衰老明显， 细胞周 期呈 现 G1→S 期阻滞，增殖 抑制。沉默 TXNIP 后 MIN6 细胞 P16ink4a 表达降低（P0.05），TRX 表达升高,活性增加(P0.05)，EZH2 表达升 高无统计学意义 （P0.05）,并且沉默 TXNIP 后细胞增殖增加，衰老延 本课题由国家自然科学基因面上项目（项目编号资助 3 缓。高糖刺激下，沉默 TXNIP 的 MIN6 细胞较对照组 P38MAPK 磷酸 化水 平降低，ERK1/2 磷酸化水平升高。P38MAPK 通路抑制后，TXNIP、P16ink4a 表达均降低，TRX、EZH2 表达无明显变化（P0.05），但 TRX 活性升高 （P0.05）。抑制 ERK1/2 通路后，TXNIP、P16ink4a 表