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洱源丛枝瑚杀虫活性组分GCMS分析 　　摘要：洱源丛枝瑚（Ｒａｍａｒｉａ ｅｒｙｕａｎｅｎｓｉｓ）的石油醚萃取物经2次柱层析分离得到对粘虫有较高毒杀活性的组分Ｂ１０３。测定了Ｂ１０３对粘虫３龄幼虫的毒杀活性，在２．６ ｍｇ／ｍＬ剂量下，其２４ ｈ的毒杀效果达１００％。通过ＧＣ－ＭＳ分析表明其中含有３４个化合物，其中相对百分含量较高的化合物包括：反油酸甲酯（４０．０６％）、棕榈酸甲酯（３１．０７％）和硬脂酸甲酯（８．２２％）等。 　　关键词：洱源丛枝瑚（Ｒａｍａｒｉａ ｅｒｙｕａｎｅｎｓｉｓ）；杀虫活性；ＧＣ－ＭＳ；脂肪酸甲酯 　　中图分类号：Ｓ４８２．３９文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）04－0820-03 　　高等真菌中含有丰富的杀虫活性物质［１，２］。早期研究表明高等真菌对昆虫表现出明显的拒食及驱避作用［３］，某些高等真菌中的蛋白质也具有明显的杀虫活性［４］。洱源丛枝瑚提取物中因含有丰富的杀虫活性组分而受到人们的重视［５］。本研究在前期研究的基础上，以粘虫３龄幼虫为供试对象，采用活性追踪法分离纯化其石油醚萃取物中杀虫活性组分Ｂ１０３，通过ＧＣ－ＭＳ分析其化学组成。本研究的开展将有助于揭示洱源丛枝瑚中抗菌的活性化合物，为其开发提供借鉴和参考。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　洱源丛枝瑚（Ｒａｍａｒｉａ ｅｒｙｕａｎｅｎｓｉｓ）子实体，购于云南，自然条件下阴干，粉碎后备用。 　　粘虫（Ｍｙｔｈｉｍｎａ ｓｅｐａｒａｔａ Ｗａｌｋｅｒ．），由西北农林科技大学无公害农药研究服务中心养虫室提供，试验时挑取生长发育状态一致的健康３龄初期幼虫供试。 　　１．２仪器 　　ＴＲＡＣＥ ＧＣ ２０００／ＤＳＱ气相色谱质谱联用仪（Ｔｈｅｒｍｏ），Ｗ５０１Ｂ型旋转薄膜蒸发仪（上海申生科技有限公司生产）；层析用石油醚（３０～６０ ℃）、乙酸乙酯、丙酮、氯仿、甲醇等溶剂均为分析纯，购于西安化学试剂厂，层析用硅胶（２００～３００目）购于青岛海洋化工厂 　　１．３方法 　　１．３．１柱层析方法对洱源丛枝瑚石油醚萃取物浸膏用玻璃柱（８０ ｍｍ ＩＤ × １ ２００ ｍｍ）进行硅胶（２００～３００目）柱层析分离，以氯仿∶乙酸乙酯（１０∶０， 　　９∶１，７∶３，６∶４，４∶６，０∶１０，体积比）和甲醇依次洗脱，收集（５００ ｍＬ／馏分），合并Ｒｆ值一致的馏分，得１５部分淋洗液，分别标记为Ｂｎ（ｎ＝各部分淋洗液编号）。采用常压柱层析对Ｂ１部分进行柱层析分离，柱型５０ ｍｍ ＩＤ × ８０ ｍｍ，硅胶２００～３００目，上样量为１５ ｇ，以石油醚∶氯仿（１０∶０，９∶１，４∶１，１∶１，０∶１０，体积比）、氯仿∶乙酸乙酯（９∶１，３∶１，０∶１０，体积比）依次洗脱，收集（２５０ ｍＬ／馏分），合并Ｒｆ值一致的馏分，浓缩，得１３部分淋洗液，标记为Ｂ１０１，Ｂ１０２，Ｂ１０３，Ｂ１０４，Ｂ１０５，Ｂ１０６， Ｂ１０７， Ｂ１０８， Ｂ１０９， Ｂ１０１０， Ｂ１０１１， Ｂ１０１２，Ｂ１０１３。 　　１．３．２ＧＣ－ＭＳ测定气相色谱条件为：ＤＢ５石英毛细管柱（３０ ｍ × ０．２５ ｍｍ × ０．２５ μｍ），接口温度２５０℃，采用程序升温模式，初始温度为６０ ℃，恒温 ４ ｍｉｎ 后以８℃／ｍｉｎ 升温至２６０℃，恒温 ２０ ｍｉｎ；载气为９９． ９９９％高纯氦气，进样量为１ μＬ；质谱条件：ＥＩ 离子源，电离电压７０ ｅＶ，离子源温度２５０ ℃，扫描范围２０～５００ ｍ／ｚ，扫描速度１ ｓ／１０倍程。ＮＩＳＴ质谱标准库计算机检索确定各成分，采用面积归一化法计算各组分的相对含量。 　　１．３．３生物活性测定对粘虫的毒杀作用采用小叶碟添加法［６］：将新鲜饲喂叶片剪成１ ｃｍ × ２ ｃｍ大小的叶碟，于供试药液中浸渍２～５ ｓ后自然晾干，同时用各溶剂作对照。在垫有滤纸的培养皿中放入饥饿４ ｈ的试虫，然后放入上述处理叶片。各试虫每处理１０头，重复３次，经２４、４８、７２ ｈ后采用目测法检查各处理试虫死亡数，并计算校正死亡率。死亡标准：虫体失水皱缩，触之不动。触杀活性测定采用点滴法［７］：将供试药剂用丙酮稀释至所需浓度，用微量毛细管（根据需要选择０．０２４～０．９６０ μＬ不同型号）定量点滴施药于试虫幼虫前胸背板，每处理点滴１０头，设３次重复，对照点滴等量丙酮，点滴处理后试虫置于养虫室［Ｔ＝（２５±１）℃，ＲＨ＝７５％±５％，Ｄ／Ｌ＝１２ ｈ／１２ ｈ］饲养，２４ ｈ后采用目测法检查各处理试虫死亡数，并计算校正死亡率。死亡标准同上。 　　２结果与分析 　　２．１生物活性测定结果 　　根据前期生物测定结果，以粘虫３龄幼虫为试虫，采用小叶碟添加法对洱源丛枝瑚石油醚萃取物柱层析Ｂ１分离组分进行生物活性测定，结果见表