活血降糖胶囊对T2DM大鼠主动脉粥样硬化血管壁核因子kB表达影响.docVIP

活血降糖胶囊对T2DM大鼠主动脉粥样硬化血管壁核因子kB表达影响 　　摘要：目的 观察活血降糖胶胶囊对2型糖尿病(T2DM)大鼠并发主动脉粥样硬化血管壁核因子-Kb(NF-kB)表达水平的调控作用。方法 选1月龄SD大鼠45只，随机取8只为空白组(灌服等量蒸馏水)，其余为实验组，成模大鼠随机分为中药组[灌服活血降糖胶囊悬浮液1.44g/(kg?d)和模型组(灌服等量蒸馏水)。每天灌胃1次，连续治疗30d后，取主动脉做常规石蜡切片，免疫组化观察其核因子-kB(NF-kB)表达的程度。结果 模型组主动脉?膜出现典型粥样硬化病变，活血降糖胶囊中药组动脉膜受损程度有所减轻。模型组主动脉血管壁NF-kB表达明显增加，活血降糖胶囊中药组均可降低其主动脉NF-kB表达(P＜0.05)。结论活血降糖胶囊可降低动脉粥样硬化大鼠主动脉壁NF-kB表达的作用，发挥对抗血管壁的炎性损伤作用。 　　关键词：活血降糖胶囊；核因子kB；动脉粥样硬化 　　中图分类号：Rj43.1　R285.5　文献标识码：A　文章编号：1672-1349(2007)12-1208-02 　　 　　糖尿病引起动脉粥样硬化(atherosderosis，AS)的机制是多方面的，单高血糖而言，形成不可逆的糖化蛋白、糖化脂蛋白、糖基化终产物(AGE)等大分子物质与血管内皮细胞上的相应受体结合，增加炎症因子的表达，增加氧化损害的程度，引起血管组织结构和功能的损害，而促使AS形成。随着炎症细胞和炎症介质的不断检出，AS不再被认为是单纯动脉壁脂质堆积的疾病，而是进展性炎症反应。在AS的启动、病变之进展及晚期并发症中炎症始终起中心作用。研究表明炎症反应过程涉及了机体多种基因，而这些基因的启动子和增强子存在一个或多个kB序列，其活化前提是核因子kB(nuclearfactorkappaB，NF-kB)的激活。在形成AS的复杂网络结构中，NF-kB的活化是一个中心环节，可与相关基因启动子或增强子特殊KB序列相结合，调控基因的表达，在免疫应答、炎症反应及细胞生长与凋亡等方面发挥重要作用。通过制作实验性2型糖尿病(T2DM)大鼠AS模型，利用免疫组织化学方法观察活血降糖胶囊对AS大鼠主动脉NF-kB表达及血管壁形态的影响，进一步探讨活血降糖胶囊的抗AS作用机制。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1．1 药物与试剂 活血降糖胶囊(主要为血竭、丹参、太子参等组成)，由广州医学院第一附属医院药剂科提供，批号：Z030222531；STZ和枸橼酸均购自广州威佳科技有限公司；血糖仪及其试纸购自OneToucHTM强生(中国)医疗器材有限公司；NF-xBD65浓缩型多克隆抗体(效价1:100)购自武汉博士德生物工程公司；二步法Supervision试剂盒及DAB显色试剂购自上海长岛生物工程有限公司。 　　 　　1．2 动物与饲料 SPF级1月龄雄性SD大鼠45只，体重140g～160g，购自广州中医药大学动物实验中心。动物合格证号：SCXK(粤)2003-0001。SPF级基础饲料由广州中医药大学动物室提供。高脂高糖饲料由基础饲料加入炼猪油15％、白糖20％、鸡蛋5％、胆固醇1％、食盐0.1％。 　　 　　1．3 实验动物模型建立及给药方法 参考黄霖等造模方法，均自由饮水，适应性喂养3d后随机抽取8只作为空白组，喂以基础饲料；其余的喂高脂、高糖饲料共6周并注射2％链脲佐菌素(STZ)30mg/kg，然后将大鼠随机分为中药组[灌服活血降糖胶囊1.44g，(k8?d)]、空白组和模型组(以相当剂量蒸馏水灌服)。每天灌胃1次，连续30d后，取主动脉常规石蜡切片做HE染色，Weiger弹力纤维染色；免疫组化法观察NF-kBp65的表达程度。 　　 　　1．4 光镜、电镜标本的制备 取主动脉血管长约1cm，生理盐水冲洗，予10％的中性甲醛溶液中固定2h～4h，逐级酒精脱水，石蜡包埋，常规切片，HE染色，Weigert弹力纤维染色以乙醇分化，二甲苯透明，中性树胶封固。显微镜下摄片。 　　 　　1．5 NF-kBp65的免疫组化结果判定 免疫组织化学染色均采用两步法，具体操作步骤按说明书进行。用O1ympus显微镜观察，阳性表现为胞核、细胞质黄染，无黄染者为阴性细胞。计算机图像分析仪测定阳性产物的光密度，每张切片选取5个高倍视野计算平均值。每组切片选取5叶视野，共计数阳性细胞占400个细胞百分比。 　　 　　1．6 统计学处理 计量资料以均数±标准差(x±s)表示，由SPSS 11.5软件对配对资料进行t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。 　　 　　2 结 果 　　 　　2．1 活血降糖胶囊对大鼠AS病变影响的光镜观察 　　2．1．1 HE染色 空白组：主动脉形态正