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应用NaCl溶液克服君子兰自交不亲和性 　　摘要：以大花君子兰（Clivia miniata）为试验材料，研究NaCl溶液对君子兰自交不亲和性的克服作用。应用2%、4%、6%、8%、10%等5种浓度NaCl溶液处理君子兰雌蕊柱头，统计坐果率，计算亲和指数；用荧光显微镜观察花粉管发育情况。结果发现，经2% NaCl溶液处理后，君子兰自交亲和指数为1.30，4% NaCl溶液处理后自交亲和指数为1.37，明显高于对照，8%～10% NaCl溶液处理后自交亲和指数低于对照；2%～6% NaCl溶液处理的花粉萌发顺利，柱头、花粉管中未见胼胝质。说明2%～4%NaCl溶液可以克服君子兰自交不亲和性，提高亲和指数。 　　关键词：大花君子兰；NaCl溶液；自交不亲和性；坐果率；亲和指数 　　中图分类号： S334.2+3；S682.1+30.3文?I标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）12-0266-02 　　收稿日期：2015-09-16 　　基金项目：吉林省教育厅科研资助项目（编号：201205013072）。 　　作者简介：高巍（1974―），女，吉林长春人，博士，讲师，研究方向为园林植物育种与植物配置。E-mail。 　　[JP2]君子兰（Clivia Lindl.）原产于非洲，目前在全世界都有栽培，而我国北方栽培大花君子兰（Clivia miniata）较为多见。自交不亲和性是高等植物一种自我保护方式[1]，克服自交不亲和性可以进行自交制种。目前，关于克服自交不亲和性的研究多见于蔬菜，如芸薹属植物[2-4]。本研究主要应用不同浓度的NaCl溶液克服君子兰自交不亲和性，为探寻克服君子兰自交不亲和的方法以及为君子兰的良种繁育提供理论指导。 　　1材料与方法 　　1.1材料 　　大花君子兰胜利杂交品种，栽培于吉林农业大学药用植物苗圃温室（温度12～32 ℃，湿度60%～80%）。自交不亲和授粉试验在吉林农业大学温室中进行，室内试验在吉林农业大学中药材学院育种实验室进行。 　　1.2试剂 　　配制2%、4%、6%、8%、10%等5个浓度NaCl溶液，并且采用套袋自交和蒸馏水处理作为对照。 　　1.3方法 　　在君子兰含蕾期进行套袋（如图1-A），在开花2 d后逐个打开硫酸纸袋，在距离君子兰柱头10 cm的位置对柱头进行药剂喷施处理，连喷3次，15 min后进行同花自交授粉，再将硫酸纸带套好，2 d后摘掉硫酸纸袋，以套袋自交和喷蒸馏水作为对照[5]。每个处理取10朵花，重复3次。 　　处理4 h后将花柱连同子房取下，固定于福尔马林-醋酸-乙醇（FAA）溶液中。每个处理取3朵花，重复3次。观察前将柱头从固定液中取出，依次通过70%、50%、10%乙醇梯度复水，然后置于1 mol/L氢氧化钠溶液中，60 ℃水浴软化[JP3]90 min，蒸馏水冲洗3次，再用0.1 mol/L磷酸钾配制的0.1%苯胺蓝溶液中染色24 h，用100%甘油压片，在Olympus IX71 倒 　　[FK（W14][TPGW111.tif] 　　[JP2]置型荧光显微镜下观察柱头上的花粉萌发及花粉管生长，并且拍照。果实生长180 d后，果皮变红，统计各处理的果实数、空瘪果实数、结籽数，并按以下公式计算坐果率、亲和指数： 　　[JZ]坐果率=坐果花朵数/授粉花朵数×100%； 　　[JZ]亲和指数=结籽数/自交花数。 　　2结果与分析 　　2.1NaCl溶液克服君子兰自交不亲和性 　　果实生长180 d后，果皮逐渐变红（图1-B、图1-C）。由表1可见，经4% NaCl溶液处理后君子兰结41粒种子，坐果率为53.33%，亲和指数为1.37，坐果率较套袋自交高30百分点，亲和指数较套袋自交高1.07；经10% NaCl溶液处理君子兰坐果率为10.00%，亲和指数降低到0.23，花被片出现盐渍化药害（图1-D）。有研究发现应用10% NaCl溶液有利于克服芸薹属植物自交不亲和性[6-9]，而本试验中应用2%～4% NaCl溶液均可以明显提高亲和指数，但经6% NaCl溶液处理后君子兰的坐果率低于蒸馏水对照，因此2%～4% NaCl溶液适合克服君子兰自交不亲和性。 　　2.2克服君子兰自交不亲和性的机理 　　植物花粉落到柱头上，经过附着、吸水、萌发，最终随花粉管进入柱头并且穿过花柱，花粉管到达胚囊释放精细胞，实现精、卵细胞融合[10]。抑制性障碍有可能出现在任何一个环节，表现为自交不亲和[11-12]。授粉2 h后，君子兰花粉开始萌发[13]，套袋自交4 h后，柱头上出现胼胝质（图2-A），导致花粉在柱头上盘绕，不能进入柱头中；胼胝质还会出现在花粉管中，导致花粉管伸长受阻，亲和指数0