不同组分固定液对组织保存效果影响的研究-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 英文缩略表……………………………………………………………………………3 中文摘要………………………………………………………………………………4 英文摘要 …………………………………………………………………………… 7 引言 …………………………………………………………………………………11 第一部分 不同组分固定液对组织形态学的影响…………………………… 13 1 材料与方法……………………………………………………………………… 13 2 结果………………………………………………………………………………20 3 讨论……………………………………………………………………………… 32 4 小结……………………………………………………………………………… 35 第二部分 不同组分固定液对 DNA 完整性的影响……………………………… 36 1 材料与方法 ……………………………………………………………………… 36 2.结果 ………………………………………………………………………………39 3 讨论………………………………………………………………………………48 4 小结………………………………………………………………………………50 结论…………………………………………………………………………………51 参考文献……………………………………………………………………………52 综述…………………………………………………………………………………56 致谢………………………………………………………………………………… 63 2 英文缩写 英文缩略表 英文全称 中文含义 HE Eosine hematoxylin 伊红-苏木素染色 IHC DAB I mmunohistochemistry 3-3’ -diaminobenzid ine 免疫组织化学 二氨基联苯 PBS Phosphate-buffer saline 磷酸盐缓冲液 PCR PAS Polymerase chain reaction Periodic Acid-Schiff stain 聚合酶链式反应 高碘酸雪夫反应 TTF-1 TG Thyroid transcription factor-1 Thyroglobulin 甲状腺转录因子 1 甲状腺球蛋白 EMA Epithelial membrance antigen 上皮细胞膜抗原 SMA CK Smooth muscle actin Cytokeratin 平滑肌肌动蛋白 细胞角蛋白 DNA E-Cad Deoxyribonucleic acid Epithelial cadherin 脱氧核糖核酸 E-钙粘附蛋白 GAPDH glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 甘油醛-3-磷酸脱氢酶 3 不同组分固定液对组织保存效果影响的研究 【研究背景】 中文摘要 在组织处理过程中，组织的固定至关重要。在过去的一百年中甲醛是国际上 通用的组织固定液，但是用甲醛固定组织主要存在以下缺点：①易挥发，有毒。 ②易引起组织内形成广泛的蛋白质交联，影响免疫组织化学染色中抗原决定簇的 暴露。③易导致 DNA 断裂，交联作用阻碍核酸的提取并局限了 DNA 片段的 PCR 扩增产物的长度。近年来，随着分子生物学技术的不断发展及疾病相关基因研究 的不断深入，分子病理学检测已成为病理诊断的重要辅助手段。在形态学、免疫 组织化学、相关遗传物质保存等方面优于甲醛的绿色环保固定液成为研究热点。 【研究目的】 探讨不同成份固定液对组织形态学的保存、组织化学、免疫组织化学染色以 及对提取组织 DNA 片段长度完整性的影响。 【研究方法】 1 固定液的配制：本实验室内配制三种无醛固定液：①R 固定液（以 RCL-2 固定液主要成分为参考）；②U 固定液（以 UMFIX 固定液主要成分为参考）③W 固定液(以 Weigners fixative 主要成分为参考)，④对照固定液 F（4%中性甲醛 固定液）。 2 标本收集：收集外科手术送检的新鲜标本 48 例：胃癌 9 例，直肠癌 5 例， 肺癌 6 例，正常甲状腺 10 例，正常乳腺 10 例，子宫肌瘤 8 例。按照《临床技术 操作规范（病理学分册）》的要求，肿瘤标本选取正常组织与肿瘤组织交界，正 常标本选取正常组织分别切取 2cm×1.5cm，厚度为 3mm 的组织块 4 块，装入包 埋盒中，分别置于固定液 R、固定液 U、固定液 W、以及 4%中性甲醛固定液（F） 中，于室温下固定 12 小时，常规脱水，石蜡包埋。3μm 连续切片粘附于载玻片， 用于 HE 染色，形态学观察。6μm 连续切片 5 片