干酪乳杆菌胞外多糖单糖组成分析.docVIP

干酪乳杆菌胞外多糖单糖组成分析 　　立题背景 　　干酪乳杆菌作为益生菌的一种，能够耐受有机体的防御机制，其中包括胃液中低pH值、口腔中的酶和小肠的胆汁酸等。所以干酪乳杆菌进入人体后可以在肠道内大量存活，起到促进人体消化吸收、调节肠内菌群平衡等作用 。 　　目前已知乳酸菌发挥主要生理功能特性的机理，除了主要代谢产物（如乳酸等）改善肠道内环境外，乳酸菌的次生代谢产物如细菌素、SOD、胞外多糖（exopolysaccharide，EPS）等也具有重要的作用。乳酸菌胞外多糖（LAB EPS）即是这类细菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的粘液或夹膜多糖。自20世纪40年代成功开发出由肠明串珠菌发酵产生右旋糖酐以来，新的微生物胞外多糖的研究与开发在世界范围内已成为研究的热点。而乳酸菌胞外多糖因具有理论和实际应用价值已经引起了许多学者的兴趣。许多乳酸菌是历史悠久的工业生产菌，乳酸菌EPS不仅对乳制品的质构和风味具有重要影响，而且有可能成为食品级多糖的一个极好的来源而广泛应用于各种食品的增稠、乳化、稳定、胶凝及保湿。 　　干酪乳杆菌 　　干酪乳杆菌的生长特性。干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）属于乳杆菌属（Lactobacillus），是革兰氏阳性菌，不产芽孢，不运动，无鞭毛，兼性异型发酵乳糖，不液化明胶；最适生长温度为37℃；菌体两端呈方形，长短不一，常成链；菌落粗糙，灰白色，有时呈微黄色，能发酵多种糖。干酪乳杆菌存在于人的肠道、口腔内含物和大便及阴道中，也常常出现在牛奶和饲料、乳制品、面团、干酪和垃圾中。 　　干酪乳杆菌的生理功能。（1）抗菌作用。研究表明，干酪乳杆菌不仅对很多细菌有拮抗作用，有的菌株还可以抑制酵母及霉菌的生长。Nemcova等报道L.paracasei可显著降低刚断奶幼猪体内梭菌属和肠杆菌的数量；雷虹等值乳酸菌发酵泡菜液中分离得到的干酪乳杆菌HD1-7对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特氏菌、沙门氏菌等很多致病菌均有抑制作用。 　　（2）免疫作用。研究表明，干酪乳?U菌可增强宿主对微生物病原体的非特异性抵抗力，加快肠道内病原体的清除，能够改善肠道菌群紊乱和肠道通透性增强等，从而防止食物过敏和急性腹泻，使抗低密度氧化脂抗体和CD4T-淋巴细胞增加，粒细胞的噬菌作用明显增强，对宿主进行免疫调节，防止肿瘤的产生。 　　多糖及其结构 　　多糖。多糖属于碳水化合物的一种，是由10个以上单糖分子通过糖苷键缩合而成的高聚物。多糖不是一种纯粹的化学物质，而是聚合程度不同的物质的混合物。多糖类一般无甜味，不溶于水，不能形成结晶，无变旋现象和还原性。多糖也是糖苷，所以可以水解，在水解过程中，往往产生一系列的中间产物，最终完全水解得到单糖。 　　目前在多糖一级结构的分析中大多采用化学方法与物理方法相结合，可基本阐明某一多糖的一级结构的大致特征。而目前用于多糖高级结构分析的方法主要是物理方法， 诸如核磁共振、X-射线纤维衍射、电子衍射等。综上所述，多糖的一级结构本身就很复杂。由于多糖结构的微观不均一性， 或分子量分散， 或是结构键中有缺陷，使多糖的一级结构分析难以得出完全正确的结构式。 　　多糖结构。多糖的结构层次与蛋白质基本相似，分为一级、二级、三级和四级。其中，一级结构变化较大，研究较为成熟，到目前为止，已经建立的分析方法主要有物理法、化学法和生物法，例如，高碘酸氧化、甲基化反应、Smit11降解、酸水解、高效液相色谱法（HPLC）、质谱法（MS）、气相色谱法（GC） 、核磁共振谱法（NMR）、红外光谱法（IR）、酶化学方法等[7]；二、三、四级结构又合称为高级结构（又称高级构象），在很大程度上取决于一级结构，对其研究较为困难，目前多糖的立体结构研究一般靠 2D-NMR及X-衍射法，除了常见的这几类技术手段外，多处于探索阶段。除此之外， 多糖的活性还与溶解度、分子量、粘度等理化性质有关。在研究多糖的构效关系时， 常用到多糖的分子修饰， 对多糖进行化学修饰，如硫酸化、化学降解、烷基化、脱硫酸化、乙酰化、酶降解等等， 有助于深入探讨其构效关系。 　　多糖的结构常因单糖构型、糖基化方式、轻基取代情祝、分支度、相邻单糖基糖链位置的不同而不同，其结构的多变性使其成为生物体内重要的信息载体。多糖结构描述通常包括单糖组成、单糖构型、分子量范围、糖昔键构型、重复单元、连接位点，甚至是空间构型。 　　对于分子量较大的多糖，对其结构研究大多停留在一级结构层面，现目前往往不能得到令人满意的结果，因此，探索更为有力的研究手段成为今后发展的重要方向。 　　多糖结构的描述包括： ①多糖的分子量范围；②多糖的单糖组分；③单糖的连接点类型；④单糖和糖苷键的构型；⑤重复单位。 　　干酪乳杆菌胞外多糖 　　胞外多糖 （Exopo