应用自动质谱退卷积定性系统和保留指数分析3种不同基原莪术挥发油成分差异.docVIP

应用自动质谱退卷积定性系统和保留指数分析3种不同基原莪术挥发油成分差异 　　[摘要]对比分析不同基原、不同产地莪术的挥发油成分差异。采用GC-MS技术和自动质谱退卷积定性系统（AMDIs），分析《中国药典》2010年版收载的3种基原莪术的挥发油总离子流色谱图。具体步骤为：应用AMDIS拆分重叠峰，通过NIST11.L标准质谱库检索，结合程序升温保留指数PTRI辅助定性；通过选择特征性碎片离子峰确定各拆分峰对应的峰面积，采用峰面积归一化法确定各化合物的相对百分含量。结果显示不同基原、不同产地的莪术挥发油成分的化合物种类及相对百分含量存在不同程度的差异，提示莪术挥发油成分可在一定程度上作为评价不同基原莪术质量及道地性特征的指标。 　　[关键词]莪术；GC-MS-AMDIS；保留指数；挥发油；定性定量分析 　　莪术具有行气破血，消积止痛的功效，为中医临床常用的破血消?Y类要药。《中国药典》2010年版所收载的莪术药材共有3种基原，分别为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val.、广西莪术C.kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang、温有B金C.wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根茎。蓬莪术主产于四川，广西莪术主产于广西，而温郁金主产于浙江。 　　挥发油是莪术的主要有效物质基础，《中国药典》2010年版以挥发油的总含量作为莪术的质量控制指标，规定3种不同基原的莪术药材所含挥发油均不得少于1.5%（mL?g-1），饮片所含挥发油不得少于1.0%（mL?g-1）。莪术具有“同名多基原”现象，不同基原莪术的道地产区也各有差异，意味着其药用植物品种及药材产地的生态环境等因素都可能影响药材中的挥发油含量，从而导致药材质量及药理作用存在差异。对于莪术挥发油成分的研究，目前多采用GC-MS或HPLC研究同基原莪术的挥发油指纹图谱，或是不同基原莪术挥发油中某几类主要成分的含量差异，少见将AMDIS和保留指数用于莪术挥发油研究的报道，而AMDIS因其能高效地将药材挥发油总离子流色谱图的重叠峰进行分离，更加准确地对化合物进行定性分析，已逐渐应用于中药材挥发油成分的研究之中。本文以从全国各道地产区收集的蓬莪术、广西莪术、温郁金共41批次饮片为研究对象，建立了GC-MS-AMDIS的检测分析方法，对这些饮片中主要的挥发油类化合物进行定性、定量分析，对比不同基原、不同产地莪术挥发油成分的差异，探寻挥发油成分可否作为药材质量及道地性特征评价的指标，以期为莪术药材的质量及道地性特征评价提供参考标准。 　　1 材料 　　1.1 药品、药材及试剂 C8-C20系列正构烷烃标准溶液（mixture no.04070，购于Fluka Chemika）；正己烷为色谱纯（购于天津市科密欧化学试剂有限公司，批号；其他试剂均为分析纯。 　　从全国各道地产区四川、广西、浙江等地收集了莪术饮片共41批，其中蓬莪术24批，广西莪术11批，温郁金7批，均由成都中医药大学中药标本中心鉴定，按照《中国药典》2010年版一部莪术项下的有关规定进行检测，符合药典各项规定。样本存放于国家种质资源库（成都）。 　　1.2 实验仪器与软件 气相色谱-质谱联用仪Agi-lent GC-MS 7890A-5975C（美国安捷伦公司）；色谱柱：Agilent 19091S-433弹性石英毛细管柱（0.25μm×250μm×30m），匹配一化学工作站：MSD-ChemStation E.02.01.1177，检索质谱库：NIST11.L（美国国家标准技术研究所）；MS database（美国安捷伦公司）；AMDIS程序（美国安捷伦公司，供拆分TIC中的重叠峰用）；BUG25-12超声波清洗机（上海必能信公司）；奥豪斯1/10万电子分析天平（美国奥豪斯公司，型号DV215CD）；微型涡旋混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）；高速台式离心机（上海市安亭科学仪器厂）等。 　　2 方法 　　2.1 挥发油提取方法及供试品溶液制备 挥发油的提取工艺及出油率的测定根据《中国药典》2010年版一部附录XD项下挥发油测定法甲法和前期实验研究，最终确定饮片挥发油提取工艺为取莪术饮片，粉碎过2号筛，称取100g粉末，加入8倍量蒸馏水，浸泡1h，水蒸气蒸馏5h，收集挥发油，得淡黄色具特殊气味的透明油状物质，加入适量无水硫酸钠脱水后离心2min，即得。 　　取各批次莪术饮片的挥发油各100μL，用正己烷稀释50倍，定容至5mL量瓶，用涡旋仪混匀后，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。 　　2.2 GC-MS测定方法 气相色谱条件：柱温采取程序升温，初始温度60℃，以20℃?min-1速率升到110℃，保持1min，再以