平卧菊三七茎中总黄酮提取工艺研究.docVIP

平卧菊三七茎中总黄酮提取工艺研究 　　摘 要：本研究采用分光光度法，以芦丁为对照品，乙醇回流提取平卧菊三七茎中总黄酮。通过对提取温度、提取时间、乙醇浓度和料液比进行单因素及正交试验。结果表明，最佳提取工艺条件：提取时间3h、料液比1g：30mL、温度80℃、乙醇浓度90%，此时黄酮得率为4.243%。 　　关键词：平卧菊三七 茎 黄酮 提取 得率 　　平卧菊三七（Gynura procumbens （Lour.） Merr）为菊科三七属植物，别名蛇接骨、树三七、石三七等。是一种攀援草本，茎匍匐，呈淡褐色或紫色，且有条棱。我国的平卧菊三七多产于广东、海南、贵州、云南[1]，近年来，江西省也开始大面积种植。平卧菊三七是一种药食两用的植物，也是十分具有开发潜力的食品和保健品新资源。平卧菊三七有诸多生理活性，如抗氧化、抑菌、降低三高等[2-6]，被认为“全身都是宝”，其根和茎更是中成药上佳的原材料。研究表明，其茎枝的活性成分主要有：黄酮类、三萜苷元类、甾醇类化合物以及香草醛、丁香醛、对羟基苯甲酸、对羟基桂皮酸、原儿茶酸等酚酸类化合物[7]。但是，对于其茎中活性物质的提取还未曾见报道。因此，为提高其综合利用价值，本研究以平卧菊三七的嫩茎为材料，采用单因素和正交试验对其中总黄酮的提取工艺进行了研究及优化，以期为平卧菊三七的综合利用及产品的开发提供参考依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与试剂 　　平卧菊三七嫩茎，产自江西省。采摘时其嫩度以人的指甲能够掐断为宜，采后去掉叶片及其他杂物，经晒干粉碎后，冷藏待用；芦丁标准品，购自天津市福晨化学试剂厂；其余试剂均为分析纯。 　　1.2 主要试验仪器 　　UV-2100型可见光分光分度计，尤尼柯（上海）仪器有限公司；Adventurer AR2140电子天平，OHAUS CORP USA；HH-4数显恒温水浴锅，国华电器有限公司。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 平卧菊三七茎的预处理 　　将待用的平卧菊三七茎粉过40目筛后，再用石油醚脱色脱脂3h，然后放入通风橱中风干至恒重，得到样品。 　　1.3.2 平卧菊三七茎中总黄酮提取工艺流程 　　平卧菊三七茎→预处理→乙醇溶液加热回流提取→过滤→定容→测吸光度→计算黄酮得率。 　　1.3.3 芦丁标准曲线的制作[8] 　　精密称取于120°C干燥至恒重的芦丁标准品10mg，加80%乙醇溶解，定容至25mL容量瓶中，摇匀。准确吸取标准品溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2mL，各加入干燥的10mL容量瓶中，加5%的NaNO2溶液0.3mL，放置6min后，加10%的Al（No3）3溶液0.3mL，放置6min再加4%的NaOH溶液4mL，加水至刻度，摇匀，放置15min，分别在510nm处测定其吸光度。以溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线（见图1），并确定回归方程：y=0.0089x-0.0001，R2=0.9922。 　　1.3.4 平卧菊三七茎中总黄酮提取方法设计[9] 　　以乙醇溶液为溶剂，采用加热回流提取法，根据试验条件按照一定的提取时间、提取温度、料液比、乙醇浓度进行单因素试验，并在单因素试验的基础上进行L9（34）正交试验以优化。通过比色法检测平卧菊三七茎中总黄酮的含量。 　　1.3.5 提取液黄酮浓度的测定和黄酮得率的计算 　　准确称取10g平卧菊三七茎粉末置于回流烧瓶中，加入适当体积分数的乙醇溶液适量，置于水浴锅中，在一定温度下回流提取一定时间，过滤后准确吸取滤液1mL，置于10mL容量瓶中，之后按照标准曲线的操作方法进行，测定吸光度后确定总黄酮浓度，进而计算出提取液中总黄酮的质量。并按下式计算黄酮得率： 　　1.3.6 验证试验 　　为确定最佳提取条件的重复性及稳定性，在最佳条件下重复3次提取试验，并计算总黄酮得率。 　　2 结果与分析 　　2.1 平卧菊三七茎中黄酮提取的 　　单因素试验结果 　　2.1.1 乙醇浓度对黄酮得率的影响 　　由图2可知，当乙醇浓度在50%～90%的范围内，随着乙醇浓度的递增，有利于黄酮类物质的的溶出；当乙醇浓度达到90%时，黄酮得率达到最高水平；随后乙醇浓度继续升高，黄酮得率反而略有下降，这可能是由于物料中的其他醇溶性物质也溶出，这些成分与黄酮类物质有竞争作用，导致黄酮得率下降[10]。因此，总黄酮提取的最佳乙醇浓度为90%。 　　2.1.2 料液比对黄酮得率的影响 　　如图3所示，料液比在1∶20～1∶30之间时，随着料液比的增大，黄酮得率是增加的；料液比为1∶30时，黄酮总得率达到最高，以后溶剂量再增大，黄酮得率并未未继续增加，故1∶30为最佳的料液比。 　　2.1.3 提取时间对黄酮得率的影响