不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液内HSP70水平和肺损伤关系的研究老年医学专业论文.docxVIP

安徽医科大学硕士学位论文 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 2 不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液内 HSP70 的水平和肺损伤关系的研究 中文摘要 目的:研究支气管肺泡灌洗液中热休克蛋白 70(HSP-70)、细胞因子在机械通气肺损 伤中的作用机制。观察不同潮气量机械通气后大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)内热 休克蛋白(HSP-70)含量的变化；观察不同潮气量机械通气后 BALF 内细胞因子白介 素 6（IL-6）、巨噬细胞炎性蛋白 2（MIP-2）含量的变化，及其与 BALF 内热休克 蛋白(HSP-70)含量的关系；观察不同潮气量机械通气后肺组织的肺损伤评分和凋亡 指数，及其与 BALF 内热休克蛋白(HSP-70)含量的关系。 方法:雄性 SD 大鼠 36 只，随机分为 3 组，大潮气量机械通气组（HV）、小潮气量 机械通气组（LV）、正常对照组(N)。大鼠麻醉后，颈部皮肤消毒后行气管切开插 管固定，并以电热垫维持大鼠体温在 37 摄氏度左右。HV 组， LV 组均连接小动 物呼吸机以行机械通气；N 组保留自主呼吸室内空气，单笼饲养。HV、LV 组潮气 量（V t）值分别为 25ml /kg，7mL/kg，通气时间 4h，吸呼比 1：2。10%水合氯醛 （0.3mL/kg）腹腔注射麻醉后，每半小时追加首剂的 1/3，维持大鼠麻醉状态。在 机械通风后，处死大鼠用生理盐水肺灌洗。收集的 BALF 经离心后，上清液分装 保存在-80°C 冰箱中以供将来使用。(1)BALF 离心后，沉渣重新悬后，光学显微镜 下用细胞计数板行白细胞计数，及涂片瑞氏染色后行白细胞分类计数；(2) 采用 BCA 方法测定大鼠 BALF 中总蛋白质浓度的含量；采用 ELISA 方法测定大鼠 BALF 中 HSP-70 和 IL-6、MIP-2 的含量；(3)肺组织石蜡切片后行苏木素-伊红（HE）染 色，光镜下观察病理学变化及行肺损伤评分，评估肺组织的损伤程度；(4)采用末 端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记测定法（TUNEL 法）检测肺组织 石蜡切片的细胞凋亡情况，评估肺组织细胞的凋亡指数。 结果: 1. 与正常对照组比较，小潮气量机械通气组和大潮气量机械通气组大鼠 BALF 中白细胞计数及中性粒细胞分类计数均显著性升高(P0.05)。2. 与正常对照 组比较，小潮气量机械通气组和大潮气量机械通气组大鼠 BALF 中 HSP-70、IL-6、 MIP-2 水平以及肺损伤病理评分、肺凋亡指数均显著性升高(P0.05)。3.与小潮气 量机械通气组比较，大潮气量机械通气组大鼠 BALF 中 HSP-70、IL-6、 MIP-2 的 水平以及肺损伤病理评分、肺凋亡指数也均显著性升高(P0.05)。4. 大潮气量机 械通气组大鼠 BALF 中 IL-6、MIP-2 以及肺损伤病理评分别与 HSP-70 呈显著正相 关（P=0.01, r=0.8538; P=0.01, r =0.8919; P=0.01, r=0.8852）。 结论:1）大潮气量机械通气可致肺上皮细胞损伤或坏死增加，HSP-70 释放到气道 内的量明显增加，促进细胞因子释放；而肺内炎症反应显著增强，可能进一步加 重肺组织的损伤及细胞凋亡的发生。 2）小潮气量机械通气相对大潮气量机械通气，肺上皮细胞损伤或坏死程度 较轻，HSP-70 胞外释放及细胞因子较少，肺内炎症反应较轻，细胞凋亡少。 3）因此机械通气时，机械牵拉造成肺组织细胞的损伤，细胞内 HSP-70 释放 入气道，促进细胞因子的释放，加重肺部炎症反应，促进肺组织细胞凋亡的发生。 关键词:机械通气肺损伤；热休克蛋白 70；白细胞介素 6；巨噬细胞炎症蛋白 2； 凋亡； The study of the relationship of heat shock protein (HSP-70) and lung damage under different tidal volume mechanical ventilation on rats Abstract Objective To study the role of heat shock protein (HSP-70) and cytokines in ventilator induced lung injury on rats. 1)To observe the concentration of heat shock protein (HSP-70) in bronchoalveolar lavage fluid from different tidal volume mechanical ventilated rats. 2)To