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快速测定植物油胆固醇含量在地沟油筛查中应用 　　摘 要 采用皂化气相色谱氢火焰离子检测器法测试了多个植物油样品，发现胆固醇峰被干扰比较严重，很难得出植物油与地沟油胆固醇含量的界定值。采用SPE进行样品前处理，对SPE处理条件进行优化，得出优化条件为称样量0.25 g ，20 mL 0.6% 乙醚正己烷 （V/V） 作为淋洗液，20 mL 15% 乙醚正己烷 （V/V） 作为洗脱液。用SPE气相色谱氢火焰离子检测器法分析了84个植物油样品和13个地沟油样品中胆固醇含量，测定结果表明，植物油胆固醇含量与地沟油胆固醇含量有明显区别，所有植物油胆固醇含量都小于50 μg/g，13个地沟油样中11个样胆固醇含量大于50 μg/g。因此，采用上述植物油胆固醇测定方法，胆固醇含量超过50 μg/g可判定为疑似地沟油，反之不成立。本方法在0～760 mg/L浓度范围内相关系数R2=0.9999，方法检出限为6.0 μg/g，两个浓度水平（17.7和695 mg/L）的相对标准偏差分别为1.6% 和1.5%，回收率为103%。 　　关键词 地沟油； 气相色谱； 固相萃取； 植物油； 胆固醇 　　1 引 言 　　关于地沟油检测方法研究有许多是通过分析植物油中胆固醇含量来判定是否为地沟油[1～4]，且多采用气相色谱法测定胆固醇。虽然相关文章较多，获得实际植物油胆固醇含量数据却非常有限，气相色谱法测定胆固醇鉴定地沟油在实际应用中还存如不同制样法分析结果相差较大、气相色谱氢离子火焰检测器分析结果明显高于气相色谱质谱联用法等问题。液相色谱质谱联用或气相色谱质谱联用测定胆固醇选择性好，但由于离子化效率对准确定量有很大影响，通常采用同位素内标弥补相关的不足，所以目前灵敏度、精密度、准确度高的胆固醇测定方法应多反应监测同位素内标液质联用[5]和同位素内标气质联用法[6]，但两种方法成本高、操作繁琐，拥有相关仪器的单位较少。地沟油多数情况下混有动物脂肪，也必定含有动物油脂的特征性甾醇――胆固醇，但若不经筛查，直接采用上述同位素内标液相色谱质谱或气相色谱质谱联用方法，由于高昂的成本和相对少的仪器，实际应用中很难操作。高效的做法应是用相对价廉、简单、有效的方法先筛查疑似地沟油，筛出的少量疑似地沟油样品再用成本高、准确性好的方法确证，这样建立的方法才有实际应用基础。胆固醇是地沟油的关键指标之一，可以用其作为筛查指标，筛查阶段不需要太强调获取准确胆固醇含量数据，但需满足以下条件：第一，测得的数据地沟油与植物油要有明显区别；第二，方法重现性好，可以得到明确、误判率低的判定设定值；第三，方法相对简单、经济、省时。基于此，本研究建立了测定植物油中胆固醇含量快速筛查地沟油的方法。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器、试剂与样品 　　GC2014C气相色谱仪，配FID检测器（日本岛津公司）。SPE硅胶柱（500 mg/3 mL，菲罗门科学仪器有限公司）。石油醚（沸程30～60 ℃）、无水硫酸钠、无水乙醇、正己烷、无水乙醚、KOH均为分析纯。 　　所有菜籽油、葵花油、大豆油、玉米油、芝麻油、花生油、橄榄油都购于大型超市，地沟油都是相关部们查获、有确凿证据的样品。 　　2.2 胆固醇标液配制 　　准确称取0.0192 g胆固醇（纯度99%，美国NUCHEK公司），用正己烷溶解并稀释至25 mL，配制成760 mg/L的胆固醇标准储备液，在4 ℃下保存。根据需要用正己烷稀释成适当浓度标准溶液。 　　2.3 样品前处理 　　2.3.1 皂化 称取1.00 g（±0.01 g） 样品，置于烧瓶中，加入1 mol/L KOH乙醇溶液10 mL，在90 ℃水浴锅上皂化1 h，冷却，移入60 mL分液漏斗，以10 mL去离子水洗涤，洗液并入分液漏斗，再以10 mL石油醚洗涤，洗液并入分液漏斗，轻轻振摇，静置分层，分出有机相和水相，水相加入10 mL石油醚振摇，分层后，将石油醚层并入有机相，以10 mL石油醚再提取一次，提取的石油醚并入有机相。用2～3 mL去离子水洗涤有机相，分层，弃去水相， pH试纸检测水相，若pH7，重复此步骤，直至pH=7。无水Na2SO4干燥后，将石油醚层移入25 mL玻璃蒸发皿，吹干，用正己烷将残余物转移到1.5 mL样品瓶，4 ℃下保存，测试时用正己烷定容。 　　2.3.2 SPE法条件优化 文献[6]已详细探讨用SPE法测试植物油中胆固醇条件，但未标出所用的SPE小柱基本信息。本研究以该文献为基础，进行SPE条件优化。称取S2（见表1）试样0.25 g（±0.01 g） 于10 mL 具塞比色管中，加入0.1 mL胆固醇标准储备液（760 mg/L）， 用5.0 mL 正己烷溶解后作为上样液。SPE柱内加入1 g无水Na2SO4，10 m