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微波辅助提取白背毛木耳多糖工艺优化ぜ翱寡趸性研究 　　摘要：采用微波辅助提取白背毛木耳（Auricularia polytricha）多糖，通过单因素试验和正交试验对多糖提取工艺参数进行优化，并研究所提取的多糖对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除作用。结果表明：多糖的最佳提取工艺参数为微波时间3.0 min、料液比1 ∶[KG-3]45（g/mL）、微波功率640 W；在此条件下多糖平均提取率为14.87%，平均加样回收率为98.25%；多糖对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率最大分别为44.57%和60.68%。本试验首次测定了白背毛木耳多糖的抗氧化活性，为白背毛木耳多糖的开发利用提供了依据。 　　关键词：白背毛木耳；多糖；正交试验；活性氧自由基 　　中图分类号： TS201.1文献标志码： 　　文章编号：1002-1302（2016）08-0357-03 　　白背毛木耳（Auricularia polytricha）属于真菌门担子菌纲银耳目黑木耳科黑木耳属[1]，是从台湾引进的一种毛木耳新品种。它是一种药食两用食用菌，分布于全国各地，营养成分种类齐全，含量丰富，具有较高营养价值。白背毛木耳作蔬菜食用，可烹制出多种菜肴，风味独特，深受广大消费者的喜爱。它性味甘平，具有补益气血、润肺止咳、止血等功效，在民间常用于气血两亏，肺虚咳嗽、咯血、吐血及痔疮出血等症状。有研究表明，毛木耳多糖作为一种重要的生物活性物质，在疑难病症的治疗方面有较好的疗效，特别在抗凝血和降血脂、增强免疫细胞、抗肿瘤、抗氧化和防治心血管疾病等方面具有较好的效果[2-3]。 　　多糖类化合物具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗病毒、抗衰老、抗疲劳以及抗凝血、抗炎、抗菌、抗惊厥、镇静、止喘及降血压等[4-6]多种生物活性及药理作用，很可能是白背毛木耳抗凝血、增强免疫细胞和抗肿瘤的有效成分之一。目前，白背毛木耳的研究主要集中在栽培技术方面，而对其多糖的开发和利用研究相对较少，张丹凤等对白背毛木耳胞内多糖和胞外多糖的提取与纯化进行了研究[7]，魏燕平等对白背木耳子实体多糖和胞内多糖提取方法进行了研究[8]。但有关白背毛木耳多糖的提取工艺及抗氧化性的研究尚未见相关报道。本研究采用微波辅助提取白背毛木耳多糖，通过单因素试验和L9（33）正交试验对多糖提取工艺参数进行了优化，并研究了所提取的多糖对于活性氧自由基的清除作用，为白背毛木耳多糖的开发利用提供了科学的依据和参考。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料与试剂 　　白背毛木耳采自云南省楚雄市东华镇，经鉴定为黑木耳属毛木耳种。样品依次用自来水、蒸馏水洗净后置于（50 ℃）干燥箱中烘干，用植物粉碎机粉碎后过40目筛，得白背毛木耳干粉，备用。葡萄糖对照品（HPLC≥98%），其他试剂均为分析纯。 　　1.2试验方法 　　1.2.1白背毛木耳多糖的提取准确称取3份白背毛木耳干粉各2.00 g，用90 mL蒸馏水在功率680 W处微波提取 3.0 min，提取完后减压抽滤，浓缩滤液，滤液用sevag法[9]除蛋白后，再往滤液中加入4倍体积的95%乙醇沉淀多糖，静止24 h，将醇沉后的白色絮状物进行离心，得白背毛木耳多糖。将白背毛木耳多糖全部转移至100 mL容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，摇匀，然后再准确吸取上述制备液1.00 mL用蒸馏水定容至100 mL容量瓶中，摇匀，得供试品溶液。 　　1.2.2葡萄糖标准曲线的建立及白背毛木耳多糖含量的测定采用苯酚-浓硫酸法测多糖含量，参照文献[10]的方法绘制标准曲线。以吸光度（D）为纵坐标，葡萄糖浓度（C，mg/mL）[JP3]为横坐标绘制标准曲线，得回归方程式：y=15.652x-0006 2，相关系数R2=0.999 1，表明葡萄糖在0.00～0.06 mg/mL 范围内与吸光度有良好的线性关系。 　　准确吸取待测液2.00 mL，加入1.00 mL新配制的5%苯酚溶液，参照文献[10]绘制标准曲线，测定吸光度，根据回归方程计算白背毛木耳多糖含量。 　　1.2.3提取工艺单因素试验参照文献[11]的方法，分别考察单因素影响：（1）选择微波时间分别为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 min进行比较，料液比1 g ∶[KG-3]40 mL，微波功率 640 W；（2）确定了微波时间3.0 min提取效果较好后，分别在料液比为1 ∶[KG-3]25、1 ∶[KG-3]30、1 ∶[KG-3]35、1 ∶[KG-3]40、1 ∶[KG-3]45、1 ∶[KG-3]50（g ∶[KG-3]mL）的条件下微波提取，微波功率640 W；（3）确定了料液比1 g ∶[KG-3]40 mL提取效果较好后，分别在100、160、320、480、640、8