急性ITP患儿外周血CD4CD25Tr细胞及其与IL18相关性研究.docVIP

急性ITP患儿外周血CD4CD25Tr细胞及其与IL18相关性研究 　　【摘要】　目的：探讨外周血CD4+CD25+调节性T（Tr）细胞和IL-18水平在急性特发性血小板减少性紫癜（AITP）患儿中的变化及AITP的发病机制。方法：选择42例AITP患儿（AITP组）和42例健康查体者（对照组），用流式细胞仪检测外周血Tr细胞数量及占CD4+细胞比例，ELISA法检测血浆中IL-18水平。结果：AITP组Tr细胞、Tr细胞/CD4+细胞比值和Foxp3+Tr细胞水平较正常对照组降低，而IL-18水平则显著升高，差异有统计学意义（P0.05或P0.01）；AITP组外周血Tr细胞/CD4+细胞水平与IL-18水平呈负相关（r=0.821，P0.01）。结论：AITP患儿存在细胞免疫功能紊乱，Tr细胞数量的减少可能刺激外周血淋巴细胞IL-18的生成，在AITP发病机制中起一定的作用。 　　【关键词】　急性特发性血小板减少性紫癜；　CD4+CD25+Tr细胞；　IL-18 　　特发性血小板减少性紫癜（ITP）为一种严重疾病，有研究表明ITP患者体内存在T淋巴细胞比例失调，预示着T细胞亚群的紊乱参与ITP的发生发展过程[1-2]。当前ITP发病机制的焦点集中于Th1/Th2细胞之间的失衡，细胞免疫功能紊乱和细胞因子与ITP的发病及临床进展有关，即以Th1漂移为主，IL-18是Thl类细胞因子，作为细胞炎性介质强有力的诱导者，通过刺激型反应，诱导严重的免疫紊乱，从而参与一些免疫疾病的发生发展，其能否促进或抑制Tr细胞的增殖尚未见报道。本研究对42例AITP患儿外周血中CD4+CD25+Tr细胞及IL-18水平进行了测定，旨在进一步探讨IL-18和CD4+CD25+Tr细胞在ITP发病过程中的作用及可能机制，为AITP的临床免疫调节治疗提供一定的理论依据和新的治疗途径。 　　1　资料与方法 　　1.1　一般资料　选择2009年1月-2010年12月在笔者所在医院门诊、住院部就诊的急性特发性血小板减少性紫癜患儿42例，其中男18例，女24例，年龄0.5~8岁，平均（5.46±2.25）岁，均符合ITP的诊断标准[3]。选取同期在本院体检科正常儿童42例作为对照组，患儿过往没有其他疾病病史，其中男16例，女26例，年龄3~9岁，平均（6.14±3.26）岁；两组年龄、性别等一般资料比较差异均无统计学意义（P0.05），具有可比性。 　　1.2　研究方法 　　1.2.2　细胞因子IL-18检测　所有受检对象清晨空腹抽取静脉血5 ml，离心5 min，3000 r/min，血清分离后放-20 ℃冰箱保存备用。所有标本采集前3个月均未接受过成分血小板输注和任何免疫抑制剂。以酶联免疫吸附法（ELISA）定量检测血清IL-18水平，试剂盒由Biosource公司提供，严格按说明书中的步骤进行操作。 　　1.3　统计学处理　应用SPSS 16.0统计学软件对数据进行处理，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，并对数据进行相关性分析，以P0.05为差异有统计学意义。 　　3　讨论 　　ITP以患者体内抗血小板抗体增多，血小板破坏过多而出血为特点，发病机制复杂，可能涉及T细胞、B细胞、巨核细胞、细胞因子、转录因子等多因素错综复杂的关系，尤其是T细胞免疫在巨核细胞受抑和血小板破坏中发挥了关键性作用[4]。CD4+CD25+调节性T细胞是近年来发现的存在于正常人外周血和脾脏中一类特定亚群的CD4+T细胞，正常人外周血淋巴细胞中约占5％~10％，具有免疫无能性和免疫抑制性两大特性的调节性T细胞亚群，介导的抑制作用非常复杂，主要通过直接细胞接触途径、分泌抑制性细胞因子途径、间接抑制途径、细胞溶解途径、竞争性抑制途径这五大途径发挥抑制功能，能抑制自身反应性T、B细胞的活化和增殖及自身抗体的产生[5]。由于ITP患者存在自身反应性T细胞的异常活化，活化的CD4+T效应细胞表面也表达CD25分子，很难区分这两群功能不相同的细胞，因此，CD4+CD25+T细胞数量并不能代表真正的调节细胞水平[6]。Foxp3表面分子是脊椎动物叉头样转录因子的总称，特异性表达在CD4+CD25+调节性T细胞上，是CD4+CD25+调节性T细胞的一个特异性标志。Foxp3表达在CD4+CD25+调节性T细胞的发育和功能上起重要作用。Walker等[7]研究表明，CD4+CD25+调节性T细胞细胞的活化可导致CD4+CD25+调节性T细胞表达Foxp3增加，并与抑制活性有关。吕学文等[7]研究发现，ITP者外周血Tr数量减少，Foxp3 mRNA表达也减少，提示Foxp3可能通过翻译水平的改变调节Tr细胞抑制功能。CD4+CD25+调节性T细胞主要通过细胞-细胞直接接触作用