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我国肉苁蓉寄主梭梭种质资源多样性AFLP分析 　　[摘要]该研究主要采用AFLP技术结合PopGene32和NTSYSpc2.1软件分析了我国西北地区5省14地103份梭梭的遗传多样性。结果表明：梭梭群体总的多态位点百分率为94.13%，5个省居群平均Nei′s基因多样性指数（H）为0.308 0，Shannon′s多态性信息指数（I）为0.467 6，说明梭梭种群内遗传多样性较高。基因分化系数（Gst）为0.313 8，即68.62%的遗传变异来自省内，31.38%的遗传变异来自省间。5个省间的基因流（Nm）为1.093 5，其基因流属于风媒异交植物的特征。AMOVA分析表明，梭梭89.34%的遗传变异出现在省内，仅有10.66%的遗传变异发生在省与省之间，进一步分析得知省内的遗传变异主要发生在各采样点居群间（84.80%）。依据Nei′s遗传距离对不同居群进行UPGMA聚类分析，得知新疆和青海的梭梭样品和其他各省相比其遗传关系较远且各自聚为一支，而甘肃、内蒙古和宁夏产区的样品遗传关系较近聚为一支。总之，我国梭梭种群遗传多样性较高，各地区之间的遗传分化较小，现阶段该物种的种内丰度较高。因此，加强不同地区的梭梭种质繁育和人工种植推广可以有效的保护野生梭梭资源并实现可持续利用。 　　[关键词]梭梭；AFLP；种质资源；遗传多样性 　　梭梭Haloxylon ammdendron （C.A.Mey） Bunge为苋科Amaranthaceae藜亚科Chenopodiaceae梭梭属Haloxylon多年生小乔木或灌木，主要分布在亚非干旱少雨的荒漠地区。我国有梭梭属植物2种，分别为梭梭H. ammdendron和白梭梭H. persicum Bunge. ex Boiss，其主要分布在新疆、青海、甘肃、内蒙古、宁夏等地[1-4]。梭梭耐干旱，适应性强，根系发达，防风固沙能力极强，是西北防治沙漠化的优良树种。其材质坚硬，燃烧值高，又是上等的薪碳植物，有“沙漠活煤”之称。嫩枝也是骆驼和羊喜食的饲料。梭梭根部常寄生被称为“沙漠人参”的名贵药材――肉苁蓉Cistanche deserticola Y. C. Ma。肉苁蓉具有补肾阳、益经血、润肠通便、提高免疫力的功效[1]。由于梭梭利用价值很高，建国以后曾遭到大量砍伐，资源一度濒临灭绝。目前，梭梭和肉苁蓉分别被列入“国家三级和二级保护植物”名录及《中国珍稀濒危植物保护名录》[5]。 　　AFLP （amplified fragment length polymer- phism） 扩增片断长度多态性是荷兰科学家Pieter Vos [6]等1995年发明的分子标记技术。目前该技术已经广泛应用在动植物遗传育种及基因组研究等领域：如遗传连锁图谱构建、种质资源遗传多样性分析、分类和进化等研究。AFLP具有DNA用量少、重复性高、多态性强等优点，但是其实验成本及对操作技能要求较高[7]。Sheng Yan，张静林及张萍等分别应用RAPD，ISSR等技术对我国部分地区的梭梭及白梭梭种质资源遗传多样性研究发现梭梭大部分遗传变异出现在种群内，而种群间的遗传变异很小[8-11]。目前，对我国西北野生梭梭分布区梭梭进行系统收集并采用AFLP技术分析其遗传多样性分析的尚未见相关研究和报道。 　　本研究应用AFLP分子标记技术，采样覆盖我国所有野生梭梭分布省区及引种栽培省区，更大样本量对我国新疆、青海、甘肃、内蒙古4个省国家级自然保护区以及宁夏人工栽培基地的梭梭种质资源多样性进行分析和评价。研究结果对了解我国西北地区梭梭遗传进化关系提供参考，为梭梭的资源保护和可持续利用指明方向，同时也为梭梭核心种质资源圃的建立及梭梭优良品种的选育提供科学依据。 　　1 材料 　　1.1 仪器 　　超净工作台SW-CJ-1D，全自动制冰机SANYO SIM-F14，立式自动电热压力蒸汽灭菌锅LDZX-40B，高速台式冷冻离心机TGL-16G，电泳仪DYY-6B，凝胶成像分析仪GELl-DOC2000，Bio-Rad PCR扩增仪、测序仪A3730XL等。 　　1.2 试剂 　　Taq酶（2 U?μL-1）（北京博友新创生物技术有限公司），dNTP （10 mmol?L-1） （北京博友新创生物技术有限公司），引物（10 mmol?L-1）（华大基因），内切酶（10 U?μL-1）（NEB公司），T4连接酶（5 U?μL-1）（NEB公司）。Marker为DL2000，100 bp DNA Ladder（北京博友新创生物技术有限公司）。相对分子质量内标为Liz-500。引物在上海生工合成。均为FAM标记。E43M65，E33M65，E33M64，E32M65，E32M86，E43M64。 　　1.3 样品