沉默aurora-b抑制骨肉瘤细胞143b在裸鼠体内生长-silence aurora - b inhibits the growth of osteosarcoma cell 143b in nude mice.docxVIP

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2018-09-10 发布于上海
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沉默aurora-b抑制骨肉瘤细胞143b在裸鼠体内生长-silence aurora - b inhibits the growth of osteosarcoma cell 143b in nude mice.docx

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沉默aurora-b抑制骨肉瘤细胞143b在裸鼠体内生长-silence aurora - b inhibits the growth of osteosarcoma cell 143b in nude mice

目录目录 PAGE PAGE IV 目录第 1 章引言 1 第 2 章材料与方法 3 2.1 细胞株 3 2.2 实验动物 3 2.3 主要仪器 3 2.4 主要试剂 3 2.5 主要试剂的配制 4 2.6 实验方法 4 2.6.1 细胞培养 4 2.6.2 细胞的复苏和换液 5 2.6.3 细胞的传代 5 2.6.4 细胞的冻存 5 2.6.5 细胞生长状态的观察 5 2.6.6 调整细胞浓度 6 2.6.7 实验动物的饲养 6 2.6.8 实验裸鼠移植瘤模型的构建 6 2.6.9 裸鼠的分组及处理 6 2.6.10 裸鼠生长状态及移植瘤的观察 7 2.6.11 组织 HE 染色法 7 2.6.12 细胞凋亡的检测 7 2.7 统计处理 8 第 3 章结果 9 3.1 裸鼠模型成瘤率及各组裸鼠体内肿瘤生长情况观察 9 3.2 各组瘤体之间的比较 9 3.3 形态学及镜下观察 10 3.4 瘤体组织细胞凋亡的检测结果 10 第 4 章讨论 12 第 5 章结论与展望 14 致谢 15 参考文献 16 攻读学位期间的研究成果 20 综述 21 中英文缩略词表中英文缩略词表中英文缩略词表英文缩写英文全称中文名称 OS LV AURKB DMEM PBS TUN EL SPF DMSO MTT Osteosarcoma Lentivirus Aurora-B Dulbecco’s Modified Eagle Medium Phosphate buffered saline Terminal deoynucleotidyl transferase mediate dUTP nick end labeling Specific pathogen free Dimethyl Sulphoxide 3 一(4，5 一 Dimethylthiazol 一 2-Y I)-2，5．diphenyItetrazolium bromide 骨肉瘤慢病毒极光激酶B 达尔伯克改良伊格尔培养基磷酸盐缓冲液脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记无特定病原体二甲基亚砜 3一(4，5．二甲基噻唑一2)．2，5- 一-- 苯基四氮唑溴盐中英文缩略词表中英文缩略词表 VII 第第 1 章引言 PAGE PAGE 10 第 1 章引言骨肉瘤是一种威胁青少年生命安全的恶性骨肿瘤，以恶性程度很高且侵袭转移能力很强备受医学界关注，使得近年来对于骨肉瘤的研究也越来越多。30 年前，骨肉瘤患者大多以手术治疗为主，但术后肿瘤易复发和转移，患者病死率仍然很高。近 10 年来，随着外科手术技术的不断进步和肿瘤化疗药物的不断发展，手术结合术后辅助化疗在很大程度上能提高骨肉瘤患者生存率，但术后因肿瘤转移而导致死亡比例仍然达到约 40% [1-2]。其原因是肿瘤的早期转移临床上缺乏有效的诊断，大部分患者在确诊骨肉瘤时其实肿瘤已经发生了转移，这也是骨肉瘤预后很差的重要原因。近几年来，骨肉瘤的诊治方法在不断进步，包括肺部转移瘤根治切除术的不断改进，但由于骨肉瘤起病隐蔽，早期诊断时往往发现不了转移灶，所以骨肉瘤的病死率仍然高居不下。因此，去研究了解骨肉瘤发生发展的机制，试图去寻求解决骨肉瘤难以治疗的新方法仍然是我们需要去研究学习的目标。随着对有丝分裂过程研究的不断深入，发现 Aurora 激酶家族参与了有丝分裂的多个过程，在维持基因组稳定性的过程中扮演着至关重要的角色，是其所必需的关键调节因子。最近研究表明，Aurora 激酶家族成员参与真核细胞的进化并发挥重要作用，参与到其中的环节包括中心体的复制和纺锤体形成等。目前从哺乳动物细胞表达中鉴定出的 Aurora 激酶家族分为三个亚群，分别为 Aurora-A，Aurora-B，Aurora-C[3-5]， Aurora-A、Aurora-B 和 Aurora-C 蛋白显示不同的亚细胞定位和功能。Aurora-A 已证实在许多肿瘤中有过表达。而在有丝分裂过程中，Aurora- B 和 Aurora-C 作为染色体过客蛋白参与其中，目前大量文献证实其在有丝分裂过程中具有调控染色体分裂和胞质分裂的作用，对染色体的排列发挥着重要的作用，因而与染色体的构建密切相关。有丝分裂很大程度上受染色体和纺锤体微管协同作用的影响，而在中间充当协调员的正是 Aurora-B。有丝分裂的过程中染色体长臂上存在着大量染色体过客蛋白，这些蛋白进行浓缩的区域在染色体的内部着丝粒上，从中期到后期的过程，这些蛋白又瞬间从着丝粒区域转移到纺锤体中央和细胞皮层的裂沟内移部位，最后定位于中间体处。可以看出，在这整个过程中，Aurora-B