斑马鱼在骨相关疾病中研究进展.docVIP

斑马鱼在骨相关疾病中研究进展 　　【摘 要】 斑马鱼作为目前新兴的研究基因和发育的脊椎动物模型生物模式，具有胚胎透明、骨骼系统发育迅速、与人类相关基因有高度同源性等特点，已经被成功运用于人类相关性疾病研究模型；而斑马鱼与人类骨骼发育相似度高，目前在骨骼发育、骨质疏松模型、骨肿瘤模型、骨关节炎等骨相关疾病方面发展迅速。对斑马鱼生物近年来在骨相关疾病模型方面的研究进展进行文献综述。 　　【关键词】 斑马鱼；骨骼发育；骨质疏松；骨肿瘤；骨关节炎；综述 　　斑马鱼最早于20世纪70年代在遗传基因学领域受到科学家的关注，随着关于斑马鱼的相关实验技术在《Nature》等杂志发表，90年代初该模型已成为最重要的模式脊椎动物之一，由于斑马鱼的基因与人类基因相似度高，使得斑马鱼成为受关注的研究人类疾病的模式动物；2012年国家斑马鱼资源中心在中国科学院水生生物研究所正式挂牌成立，国内斑马鱼生物模型研究虽然起步较晚，但发展迅速，截止目前已有250多个实验室参与斑马鱼相关研究。随着研究深入，发现该模型在骨骼系统较传统鼠兔模型具有成本低、周期短等优势，尤其是在骨质疏松、骨关节炎、骨肿瘤等骨相关疾病及治疗药物通量筛选方面发展迅速，本文就斑马鱼模型在骨相关疾病中的研究应用概况进行综述。 　　1 斑马鱼的特点和优势 　　1.1 斑马鱼简介及特点 斑马鱼是一种原产印度的热带淡水鱼，属脊椎动物亚门辐鳍鱼纲鲤科，由于其体侧有银蓝色的纵向条纹而得名，又名蓝条鱼、花条鱼、斑马担尼鱼。斑马鱼体型纤细呈纺锤形，成体长3～4 cm，对水质要求不高，孵出后约4个月达到性成熟，成熟鱼每隔几日可产1次卵。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。发育温度要求25～31 ℃。孵出水??24 ℃时，受精卵经2～3 d孵出仔鱼；水温28 ℃时，受精卵经36 h孵出仔鱼，雌鱼每次产卵200～300枚，易于实验室养殖和研究。 　　1.2 斑马鱼在骨相关疾病研究的优势 斑马鱼在骨相关疾病研究方面具备如下优势。①与人类基因、骨骼发育相似度高。Howe等[1]通过对斑马鱼基因序列组合与人类基因比较，发现其与人类基因相似度达到87%，即约70%的人类基因至少有一个明显的斑马鱼直系同源物；斑马鱼能够直接从间充质细胞和软骨前体育出骨骼[2-3]，在解剖学上类似于哺乳动物骨骼，提供了一种有用的骨骼研究动物模型。②斑马鱼繁殖快、耗时短、成本低、生物安全性好[4]，不易传染疾病。通过对比斑马鱼与鼠、兔等哺乳动物在治疗骨相关疾病的药物毒性发育中研究发现，斑马鱼较鼠、兔具有测试成本低、速度快等优点[5]，证明脊椎动物斑马鱼已成为高通量药物筛选的易处理模型生物。③胚胎发育迅速、易于观察。由于斑马鱼能够体外受精和发育，胚胎透明，且胚胎发育过程清晰可见[6]，斑马鱼颅面骨骼的骨化开始于受精后3 d，受精约120 h后斑马鱼各组织、脏器、骨骼均已发育完全，在显微镜下可直接观察其胚胎发育情况，在第8天可使用茜素红染色通过目视检查在标准解剖显微镜上分析胚胎，拾取不显示软骨缺陷的特异性骨突变体，具有耗时短，对骨骼发育畸形易于观察的优势。④可塑性强。研究发现斑马鱼骨模型较鼠、猴骨模型在基因转录与敲除等方面可塑性强[7]，应被视为越来越有价值的骨模型。总而言之，斑马鱼骨模型相对传统的鼠、兔、猴动物模型具有繁殖快、成本低、耗时短、效率高、灵敏度高等优势，被广泛运用于胚胎发育、遗传与基因学、药物筛选、人类疾病模型的研究，目前已有神经系统、血液系统、肿瘤及骨相关疾病系统等人类疾病模型建立，因该生物的骨骼系统发育迅速，被众多研究者称为研究脊椎动物发育的理想模式，是药物毒性测试研究的顶级模式[8]。 　　2 斑马鱼模型在骨相关疾病中的研究 　　2.1 骨发育方面研究 人类骨骼发育是由间充质干细胞发生[9]，从胚胎早期间充质干细胞骨原基起始。目前，骨的发生方式主要有膜内成骨和软骨成骨两种方式，由于斑马鱼与人类骨骼发育相似度高，故在骨发育基因遗传疾病、骨生长信号通路、成骨不全、脊柱侧弯等方面均有研究。Sawada等[10]通过使用斑马鱼模型，发现短的同源基因（SHOX）通过延迟骨矿化前胚胎生长及早期胚胎损失来影响前椎骨和颅骨骨骼的骨形成，并在全身早期胚胎生长中起重要作用，推测出SHOX基因的体内成骨作用在人与斑马鱼两者的进化相似。此外有研究通过使用wehTp85c作为研究铁缺乏的骨代谢模型，发现wehTp85c突变幼鱼表现出骨形成缺陷，同样得出斑马鱼模型可用于骨骼发育的基因研究[11]。由于斑马鱼的基因序列组合在许多方面与人类相似，骨骼和矿化组织也不例外，故在与人类疾病同源的骨矿化障碍中，斑马鱼模型可以对遗传性骨骼疾病调查的小鼠和组织培养系统形成补充[12]。此外，该幼鱼的光学透明度允许体内成骨细胞和破骨细胞