斑马鱼血栓模型在中药抗血栓活性筛选中适用性研究.docVIP

斑马鱼血栓模型在中药抗血栓活性筛选中适用性研究 　　摘要：目的 考察斑马鱼血栓模型在中药抗血栓活性筛选中的适用性。方法 采用盐酸肾上腺素诱导建立活体斑马鱼血栓模型。将斑马鱼随机分为空白组、模型组、阳性对照组、给药组，各组给予相应药物或胚胎培养水。16 h后，用邻联茴香胺染色液染色，计算斑马鱼心脏红细胞染色强度，进行定量分析；观察转基因斑马鱼血小板聚集情况，进行定性分析。结果 与模型组比较，100 μg/mL丹酚酸B，300、900 μg/mL丹参水提取物，45 μg/mL 95%乙醇提取物，400、1200 μg/mL消栓通络片均能明显抑制斑马鱼的血栓形成（P0.01）。结论 斑马鱼血栓模型对中药抗血栓活性筛选具有良好的适用性。 　　关键词：斑马鱼血栓模型；中药；活性筛选；适用性 　　DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.07.014 　　中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）07-0058-04 　　Abstract： Objective To investigate the applicability of zebra fish thrombosis model in antithrombotic activity screening of Chinese materia medica. Methods The living zebra fish thrombosis model was induced by adrenaline hydrochloride. Zebra fish were randomly divided into blank control group， model group， positive medicine group and medication group. Each group was given the corresponding medicine or embryo culture water. O-anisidine staining solution was used to stain and calculate the staining intensity of erythrocytes in zebra fish heart， and quantitative analysis was carried out. The platelet aggregation of transgenic zebra fish was observed and under qualitative analysis. Results Compared with the model group， 100 μg/mL salvianolic acid B， 300， 900 μg/mL aqueous extract of Salvia miltiorrhiza， 45 μg/mL 95% ethanol extract and 400， 1200 μg/mL hypothalamus could significantly inhibited the formation of zebra fish thrombosis （P0.01）. Conclusion Zebra fish thrombosis model has good applicability in antithrombotic activity screening of Chinese materia medica. 　　Key words： zebra fish thrombosis model； Chinese materia medica； activity screening； adaptability 　　从中药中发现抗血栓活性显著的先导化合物已成为新药研发的一个重要途径。但中药化学成分复杂，用药形式多样，并且目前抗血栓药物筛选主要采用体外凝血实验和传统啮齿类动物在体??栓模型。前者只能针对部分靶点[1]，后者在进行活性筛选时，所需动物数量大、操作复杂、周期长，尚不适用于抗血栓药物的大规模筛选[2]，使中药抗血栓活性成分的筛选成为难题。而斑马鱼作为一种新的动物模型，具有 　　养殖成本低，发育周期短，幼鱼透明易观察，产卵量大等独特的优势[3]。且Williams C H等[4]研究发现，斑马鱼与人类血液系统中的血小板和凝血因子有许多共同的特点，因此，逐步成为抗血栓药物筛选的模型生物。本研究采用盐酸肾上腺素诱导建立斑马鱼血栓模型，筛选不同形式中药（单体成分、中药提取物、复方）的抗血栓活性[5]，进而探讨斑马鱼血栓模型在中药活性筛选中的