有机硒对断奶羔羊十二指肠形态学及血清GSH―Px活性影响.docVIP

有机硒对断奶羔羊十二指肠形态学及血清GSH―Px活性影响 　　摘 要：为了研究有机硒饲料对断奶羔羊十二指肠组织形态结构及血清GSH-Px活性的影响，选择体重、生理状态相近及健康的本地断奶羔羊18只作为试验动物，随机分为2组，试验羊均编号，每组9只，一组在基础日粮中按体重添加0.3mg/kg有机硒，另一组添加0.3mg/kg无机硒。预饲期10天，正试期饲喂60d左右。饲喂试验结束后将绵羊屠宰，取十二指肠接近幽门部位的组织样，采用常规的石蜡切片HE染色方法制作切片，通过显微测微尺的方法测定断奶羔羊绒毛高度、隐窝深度；并采集饲喂试验前后羊血，应用谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒测定羊血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性。结果表明，有机硒组断奶羔羊的十二指肠绒毛高度和绒毛高度/隐窝深度比值均为显著高于无机硒组断奶羔羊（P0.05）。饲喂硒添加饲料后，有机硒组断奶羔羊血清GSH-Px活性较无机硒组变化显著（p0.01）。结论：日粮中添加有机硒饲料可以促进断奶羔羊小肠的发育，可以提高断奶羔羊血清抗氧化酶活性。 　　关键词：有机硒；断奶羔羊；?q毛高度；隐窝深度；GSH-Px活性 　　硒作为动物体的必需微量元素，被广泛用于畜禽企业，主要也用来防止动物缺硒而产生的问题，以及对维持动物正常的生长发育和黏膜兔疫功能有重要的作用。同时，硒是一种抗氧化作用的元素，具有保护细胞膜的完整性的作用。硒作为动物体的必需微量元素，主要在动物的小肠位置吸收，有人研究过硒可以直接参与免疫功能，在黏膜免疫上有促进的作用，也有研究者利用小鼠进行胃肠外加硒试验，说明了硒在动物营养上对小肠结构有维护的功能。然而，硒在断奶羔羊的肠道形态结构上会不会有明显作用，目前缺乏相关的报道，不过有研究显示有机硒的作用比无机硒对动物有利。本试验通过给断奶羔羊添加有机硒和无机硒，观察断奶羔羊十二指肠形态结构和血液抗氧化酶活性是否有变化，为有机硒在断奶羔羊饲料中的添加等提供理论依据。 　　一、 材料与方法 　　1.试验材料 　　（1）试验动物。体重、生理状态相近及健康的本地断奶羔羊18只，来源于同心县德瑞牧业有限公司。 　　（2）饲喂饲料。 　　有机硒添加：基础日粮中添加由宁夏农科院配制成的酵母硒。 　　无机硒添加：在基础日粮中添加亚硒酸钠（Na2SeO3）。 　　（3） 主要试剂及仪器。乙醇、甲醛、二甲苯、石蜡、中性树胶（产品批号生产厂家：上海华申康复器材有限公司）、苏木精（产品批号生产厂家：上海中秦化学试剂有限公司）、伊红（产品批号生产厂家：天津市凯信化学工业有限公司）、GSH-Px试剂盒（南京建成生物工程研究所）等。石蜡切片机（型号：QP-3268；厂家；武汉器械有限公司）或冰冻切片机、恒温蜡箱（型号：DGG-9076AD；厂家：德州市昊诚实验仪器有限公司）、熔蜡缸、电热恒温水浴锅（型号：单孔DK-98-II；厂家：上海析域仪器设备有限公司）、显微镜（型号：RW-200116DIC；厂家：产于日本）、紫光分光光度计（上海）、离心机等。载玻片、盖玻片等实验室消耗品，刀、剪等解剖器械。 　　2.试验方法 　　（1）试验动物分组。将选好的18只断奶羔羊，随机分为2组，一组饲喂日粮中按体重添加0.3mg/kg酵母硒，另一组饲喂日粮中按体重添加0.3mg/kg亚硒酸钠，试验羊只均编号入舍，分槽饲养。 　　（2） 饲养管理。试验羊只进入圈舍前7天，用0.2%新洁尔灭溶液将舍内地面、门窗、墙壁、水料槽进行彻底消毒。预饲期前对试验羊进行驱虫、健胃及防疫。用抗蠕敏进行体内驱虫3天；之后口服大黄苏打片进行健胃，连服3天。试验羊只每天分两次饲喂（早6：30、晚17：30），自由饮水。预饲期10天，正试期2个月，观察羊的活动、精神及健康状况等，并从正试期起开始记录每天给料量和采食量。 　　（3）样品采集。 　　①血液样品采集。在试验第1d和60d在早晨，进行静脉采血，收集血液，分离血清，至于-20℃低温冰箱里冻存备用。 　　②组织样品采集。饲喂结束后将断奶羔羊行屠宰（屠宰前禁食12小时），屠宰后立即打开腹腔，迅速采集十二指肠接近幽门部组织样品，放入10%中性福尔马林固定液中固定。 　　（4） 石蜡切片制作及HE染色。利用组织学常规的石蜡切片HE染色的方法进行操作。其制作过程主要包括：取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→染色→透明→封片等。首先，对采取的组织样进行编号，并修整组织块大小为1cm。将组织块放入流水中冲洗12小时；再用由低到高浓度梯度酒精进行脱水；在配制比例为1：1的无水乙醇与二甲苯进行透明，再次经过二甲苯透明组织样，时间根据组织块大小而定，总时间不宜超过2小时；然后，进入浸蜡和包埋阶段。根据石