枇杷核苦杏仁苷醇提工艺及其药效学研究.docVIP

枇杷核苦杏仁苷醇提工艺及其药效学研究 　　摘要 进行了枇杷核苦杏仁苷的醇提工艺研究。乙醇提取工艺的最佳条件为：60℃、65%乙醇、固液比1∶10、提取时间2h、提取1次，苦杏仁苷提取率达92.9%；并对枇杷核提取物进行了止咳和抗炎药理学评价。结果显示，枇杷核提取物对小白鼠具有明显的止咳、抗炎效果，最佳的用量为100~150mg/kg枇杷核提取物（相当于生药量2~3g）。 　　关键词 枇杷核；苦杏仁苷；提取；药效 　　 　　枇杷核为蔷薇科植物枇杷的种子，干果仁约占鲜果重的20%，其中苦杏仁苷（Amygdalin，C20H27O11）含量约为2%[1]。现代医学研究表明，枇杷核中的苦杏仁苷不但可以用于镇咳和抗炎，还可以用于治疗肿瘤[2]。笔者采用溶剂乙醇提取、HPLC分析和冷冻干燥等技术，从枇杷核废弃物中提取苦杏仁苷。在此基础上，采用灌胃给药的方式，对小白鼠进行SO2致咳试验和耳廓肿胀试验，考察其对小鼠的抗炎和止咳功能。此方面的研究国内外未见报道，以期为进一步开发枇杷核苦杏仁苷入药提供指导依据。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1材料与仪器 　　1.1.1原料。枇杷核为莆田产“解放钟”枇杷的核，于2005年6月取自于福建省莆田市华亭，晒干，粉碎，过60目筛备用；清洁级雄性小鼠（体重22±2g）和基础饲料，购自福建医科大学动物中心。阿司匹林肠溶片，平光制药公司生产，25 mg/片，国药准字批号0512021；川贝清肺糖浆，漳州片仔癀药业股份有限公司，国药准字批号0504009。 　　1.1.2仪器。HH-4型数显恒温水浴锅，广东深圳国华电器有限公司生产；高效液相色谱仪Agilent1001、色谱柱Hypersil ODS（4.0mm×250mm，5μm），Agilent公司生产；UV-1700药物分光光度计（带UVProbe工作站软件），岛津公司生产；ALPHA 1-2 LD真空冷冻干燥机，CHRIST公司生产；旋转蒸发仪（EYELA N-1000旋转蒸发器，EYELA SB-1000数显水浴锅），EYELA公司；SHB-III循环水式多用真空泵，河南郑州长城科工贸有限公司生产；苦杏仁苷标准品，中国药品生物制品检定所生产；95%食用酒精，福州二化工业有限公司生产；甲醇等色谱纯试剂，江苏汉邦科技有限公司生产。 　　1.2枇杷核苦杏仁苷的溶剂提取试验方法 　　1.2.1枇杷核中苦杏仁苷总量的确定。苦杏仁苷含量测定采用高效液相色谱法，以苦杏仁苷标准品为对照。色谱条件：高效液相色谱仪Agilent1001，Agilent检测器，色谱柱Hypersil ODS（4.0mm×250mm，5μm）；流动相为甲醇：0.01%磷酸水溶液（20∶80），流速1.0 mL/min，柱温34℃，检测波长215nm，进样量20μL[3]。定量取枇杷核，于60℃条件下，以60%乙醇，按液固比10∶1反复浸提数次，每次2h，直到以HPLC检测苦杏仁苷不被浸出为止。即以多次浸出的苦杏仁苷量作为枇杷核苦杏仁苷总量，并以此为据进行后续提取率的计算。 　　1.2.2枇杷核苦杏仁苷的醇提单因素试验。醇提基本条件为：提取温度60℃，醇浓度为65%，液固比10∶1，提取时间2h，提取次数为1次。通过改变醇浓度（15%、30%、50%、65%、75%、85%、95%），提取温度（30℃、45℃、60℃、75℃），提取时间（1h、2h、3h、4 h），液固比（8∶1、10∶1、15∶1、20∶1V/W）等4个因素水平，以枇杷核中苦杏仁苷的提取量为评价指标，进行单因素考察。 　　1.2.3枇杷核苦杏仁苷醇提工艺的正交优化。醇提基本条件为：提取温度60℃，乙醇浓度为65%，液固比10∶1，提取时间2h，提取次数为1次。根据醇提单因素试验结果，选择3个因素进行L9（34）正交试验，确定枇杷核苦杏仁苷的最优醇提取条件。 　　1.3镇咳试验方法 　　采用SO2刺激法[4]进行诱导咳嗽，研究枇杷核提取物的止咳活性的具体操作步骤是：取健康小鼠按体重均分6组，每组各6只（雌、雄各半），体重23±4g，第1组枇杷核提取物100mg/kg，第2组枇杷核提取物150mg/kg，第3组枇杷核提取物200mg/kg，第4组枇杷核提取物300mg/kg，对照组同体积生理盐水，阳性对照川贝清肺糖浆10mL/kg，给药方式为灌胃，给药1h，将小鼠放入广口瓶内，注入SO2，观察小鼠咳嗽的潜伏期并计算止咳率。 　　止咳率（%）=给药组咳嗽潜伏期/对照组咳嗽潜伏期×100 　　1.4抗炎试验方法 　　根据卫生部《中药新药研究指南》的方法，采用二甲苯致耳肿胀法，研究枇杷核提纯物的抗炎活性的具体操作步骤是：取健康小鼠按体重均分4组，每组