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构建玉米新品种新科19指纹图谱SSR引物筛选 　　摘要：以玉米新品种新科１９及其亲本为材料，从５０对玉米ＳＳＲ引物中筛选出在新科１９双亲之间多态性明显、重复性较好的５对引物ｂｍｃ１７９２、ｂｎｌｇ１４９６、ｕｍｃ２１０５、ｂｎｌｇ２２９１和ｐｈｉ０６５，可用于鉴定新科１９的真实性，同时为鉴定该种子的纯度提供参考。该方法具有准确可靠、实用性强等优点，可为生产上杂交种新科１９真实性的快捷有效鉴定提供科学依据。 　　关键词：玉米；杂交种；ＳＳＲ标记；真实性鉴定 　　中图分类号：Ｓ５１３ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）17－3635-02 　　 　　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ＳＳＲ Ｐｒｉｍｅｒｓ ｆｏｒ Ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｏｆ Ｍａｉｚｅ Ｈｙｂｒｉｄ Ｘｉｎｋｅ １９ 　　 　　ＷＡＮＧ Ｗｅｎ－ｊｉｅ，ＺＨＯＵ Ｌｉａｎ－ｄｏｎｇ，ＧＵＯ Ｙｕ－ｘｉａ，ＬＩＵ Ｊｉｎｇ－ｗｅｉ，ＬＩＵ Ｘｉ－ｃｕｎ 　　（Ｘｉｎｘｉａｎｇ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｈｅｎａｎ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ ４５３０００，Ｈｅｎａｎ，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｏｆ Ｘｉｎｋｅ １９ ａｎｄ ｉｔｓ ｐａｒｅｎｔｓ ｗａｓ ｅｘｔｒaｃｔｅｄ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ ｔｈａｔ ｃｏｕｌd ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ ｆｒｏｍ ５０ ｐａｉｒｓ ｏｆ ＳＳＲ ｐｒｉｍｅｒｓ． Ａｓ ａ ｒｅｓｕｌｔ， ｆｉｖｅ ｐａｉｒｓ ｏｆ ｐｒｉｍｅｒｓ， ｂｍｃ１７９２， ｂｎｌｇ１４９６， ｕｍｃ２１０５， ｂｎｌｇ２２９１ ａｎｄ ｐｈｉ０６５， ｗｈｉｃｈ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ apparent ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐａｒｅｎｔｓ， ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ａｓ ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ ｆｏｒ authenticity identification ｏｆ Ｘｉｎｋｅ １９． Ｔｈｉｓ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｃｃｕｒａｃｙ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ ｐｒａｃｔｉｃａｌｉｔｙ ｗａｓ ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｅｓｔｉｎｇ ｓｅｅｄ authenticity ｏｆ Ｘｉｎｋｅ １９ ｒａｐｉｄｌｙ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｍａｉｚｅ（Ｚｅａ ｍａｙ Ｌ．）； ｈｙｂｒｉｄ； ＳＳＲ ｍａｒｋｅｒ； authenticity identification 　　 　　随着品种数量的增多以及少数骨干亲本的集中应用，玉米品种间的遗传差异越来越小，同工酶和蛋白质电泳技术已经不能有效鉴定种子的纯度和真实性。而ＳＳＲ分子标记具有快速、准确、多态性丰富、可操作性强的特点［１］，在构建玉米新品种指纹图谱中具有独特的优越性。赵久然等［２］确定了玉米自交系和杂交种指纹图谱绘制的ＳＳＲ核心引物，为构建玉米自交系和杂交种ＳＳＲ指纹图谱，从而对种子的纯度和真实性进行鉴定提供了很大方便。 　　新科１９是河南省新乡市农业科学院育成的优质、高产、多抗的玉米杂交种，２０１０年通过河南省农作物品种审定委员会审定。为了更准确、有效地鉴定新科１９，对该品种及其亲本进行分子指纹图谱构建和比较，本研究试图筛选出能有效鉴定供试材料的ＳＳＲ标记，以期为玉米生产中种子纯度和真实性的鉴定提供参考依据。 　　１材料与方法 　　１．１供试材料 　　新科１９杂交种及其母本ｋ３８０和父本Ｈ８６３均为新乡市农业科学院玉米课题组保存。亲本经严格自交繁殖去杂，并组配杂交种新科１９。 　　１．２ＤＮＡ的提取 　　新科１９杂交种及其亲本种子在３０／２５ ℃培养箱内进行暗培养，待其幼苗长至３叶左右时，取黄化叶片混样，置于液氮中冷冻、研磨，用ＣＴＡＢ法提取基因组ＤＮＡ［３］，由于玉米叶片含次生物质较多，在提取液里加入１％巯基乙醇。紫外分光光度计检测ＤＮＡ浓度和质量，将ＤＮＡ样品浓度稀释至２０ ｎｇ／μL，－２０ ℃保存备用。 　　１．３引物合成及电泳分析 　　ＳＳＲ分析中所用的５０对引物序列由玉米基因组数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｉｚｅｇｄｂ．ｏｒｇ／ｓｓｒ．ｐｈｐ）获得，分布在玉米１０条染色体上［２，３］，引物由上海英骏生物工程有限公司合成。ＤＮＡ聚合酶、ｄＮＴＰ购自宝生物工程（大连）有限公司。２０ μＬ反应体系包括２ μＬ １０×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ、１ Ｕ Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶、０．２ ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰｓ、０．２５ μｍｏｌ／Ｌ引物和２０ ｎｇ模板ＤＮＡ。ＰＣＲ扩增程序为