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浅谈生物发光技术用于污染毒性测试进展 　　摘要:本文介绍了发光菌的发光机理和毒性测试的发展历史,并采用淡水发光菌的生物发光技术在污染物的毒性研究测试方面的应用及其特点作了分析。 　　 　　关键词:发光菌;毒性测试;Q67淡水发光菌 　　 　　1前言 　　目前,针对普遍采用的发光菌毒性测试采用海水发光菌存在的问题,建立了以青海湖菌为生物种的测试方法体系;针对环境样品毒性测试中基体干扰等问题,发展了利用半渗透抽样技术作为有机毒污染物样品富集和前处理手段的方法;同时将生物毒性测试技术作为用于水处理过程中毒性变化规律研究和环境风险评价。所取得的主要进展包括: 　　(1)建立了基于新型淡水发菌(Vibrio-qinghaiensis sp,Nov―Q67)的发光菌急性测试体系。系统研究PH、菌密度、反应时间、离子强度及天然水体中几种主要离子对测试的影响,通过对比研究法,考察了Q67和Vinto fisheri-T3对重金属、农药和氯酚等典型污染物毒性测试的结果,Q67测试天然水体急性毒性和水处理厂过程毒性变化规律,通过研究认为与T3相比,所研制的Q67淡水发光菌测试体系对淡水水体和水处理过程急性毒性测试具有明显的优势。 　　(2)将半渗透膜技术(triolein-SPMD)作为水样中有机组分的富集技术,分别针对洋河和城市污水生物处理过程中有毒有机污染物毒性变化进行发光菌急性毒性检验。 　　(3)应用生物毒性测试方法对自来水厂和北京官厅水库/永定河水体的致变进行了分析测试,并和同期进行的化学分析结果进行了比较。通过具体案例研究,提出生物毒性测试技术作为化学监测的一种补充手段,在评价水体污染环境风险和工艺过程优势方面具有重要的应用价值。 　　早期采用的生物毒性测试手段主要是单指标生物毒性实验,即将一种生物暴露于两个或更多浓度剃度的有毒物质中,保持其他条件恒定,以观察生物效应(死亡或抑制;生理改变;行为改变等)。这种实验能够较准确的反映某种化合物对某一特定生物产生的特定的毒性作用。 　　然而水中有成千上万种生物,对毒物的敏感程度有很大的差异。70年代后,发展了多指标生物测试(Multispecies Bioassay)。近年来对生物的研究更加趋于微观。 　　 　　2 发光菌的发光机理 　　而发光菌又是怎样发光的呢?发光菌的光谱范围约420～670nm,λmax在475～485nm左右,为单一发射蜂,λmax和半高宽有种差异。发光菌生长初期发光很弱,对数生长中期发光强度达到高峰,稳定期发光强度下降。 　　微生物在氧化代谢或呼吸作用过程中得到能量,呼吸作用等于生物的氧化作用,好气性细菌具有细胞色素氧化还原酶系统,由于好气性细菌的细胞色素可以作为氢的最终受体而利用空气中的氧,底物的氢传递到NAD(烟酰胺腺嘌呤核苷酸)的脱氢酶的辅基上,结果形成还原型的AAD-H2,它可以将氢传递给黄素腺嘌呤二核苷酸FAD,后者转化为FAD-H2,就可以传递给细胞色素,能量以ATP(三磷酸腺苷)的形式释放。 　　发光细菌的发光过程是一种光呼吸过程,是上述电子传递链上的一个侧支,还原型的黄素单核苷酸,FMNH2充当反应底物,荧光酶起催化作用,长链脂肪醛起作改变荧光酶构造的“修饰”作用。 　　荧光酶通过分子氧催化FMNH2和脂肪醛(RCHO)的氧化,这种氧化还原反应结果便产生磷光(465～490nm之间较多)。外界条件和培养基成分PH,温度,氧浓度变化会影响细菌的发光,而有毒的化学物质,重金属离子,抗生素,化学治疗剂,农药等同样会影响细菌发光,故采用发光细菌作为敏感的指标物测定有毒有害物是可能的。 　　 　　3 发光菌毒性测试的发展 　　在20世纪60年代人们就考虑如何应用发光细菌荧光酶进行各项生物测定,这些测定均源于以下反应[7]:FMNH2+RCHO+O2→FMN+RCOOH+H2O+光.FMN(黄素单核苷酸)为具有荧光素的物质。发光菌在正常生活状态下,体内荧光素在有氧参与时,经荧光酶的作用会产生荧光,当受到外界因素的影响,如化合物的毒性作用时,发光减弱,并呈线性相关。 　　1978年在美国Beckman仪器公司发展了一种生物发光光度计,即Microtox系统,功能较为完备,尤其是可以控温,这时稳定发光度极为重要。所用菌种是明亮发光杆菌(P.phosphorem)。其灵敏度可与鱼类96小时急性毒性试验相媲美,因其快速、简便、费用低廉而独具特色,从此发光细菌毒性测试(Luminescentbacteria toxicity test,L.B.T)技术在全世界范围内得到了广泛应用。 　　明亮发光杆菌(Photobacterium phosphoreum)在正常生活状态下发出荧光为其新陈代谢的一部分。在有氧条件下,菌体内的荧光素