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猪肉中氯丙嗪残留量测定国家标准方法优化 　　摘要：目的 针对猪肉中氯丙嗪残留量测定的国家标准方法回收率较低的情况，对国标方法进行优化。方法 对萃取步骤中水相的pH和反萃取步骤中有机相的用量进行考察，选择合适的条件，建立氯丙嗪残留量测定方法。结果 萃取步骤中水相的最适pH为-0.3，即用2mol/L的盐酸替代pH=3的磷酸二氢钾缓冲液。反萃取步骤中甲基叔丁基醚的最适用量为3mL，省去氮气浓缩步骤，减少操作步骤和实验时间，可保证反萃取率高和可操作性强。该方法的检出限为0.15μg/kg，回收率在85.57%～95.97%之间（RSD=4.7%，n=6）。结论 该方法可提高国标方法的灵敏度和回收率，可操作性强，适用于猪肉中氯丙嗪残留量的检测。 　　关键词：猪肉；氯丙嗪；兽药残留；国家标准 　　氯丙嗪（Chlorpromazine），又名冬眠灵，是第一个抗精神病药，临床上主要用于治疗精神分裂症、躁狂症和其他精神病性障碍。近年来，一些不法商人常常在畜禽长途运输过程中使用大量的氯丙嗪，以减轻畜禽的应激性，降低死亡率[1]。氯丙嗪进入人体后会产生许多不良反应，危害人体的健康[2-3]。 　　现行国家标准（以下简称国标）中测定猪肉中氯丙嗪残留量的标准为GB/T 20763-2006。笔者实际应用中发现，按国标方法测得的氯丙嗪回收率较低（在10%左右）。本实验对该国标方法进行优化，以提高方法回收率，兼顾其可操作性和准确性。 　　1仪器与设备 　　Agilent 1100-API3000液质联用仪（美国Agilent；美国Applied Biosystems）；XS205电子天平（十万分之一）（瑞士Mettler Toledo）；BSA2202S电子天平（百分之一）（德国Sartorius）；PB-10 pH计（德国Sartorius）；TW20恒温水浴箱（德国Julabo）；HY-2往复振荡器（常州澳华仪器有限公司）；LG10-2.4A高速离心机（北京京立离心机有限公司）；MS3 digital漩涡混合器（德国IKA）。 　　2样品与试药 　　盐酸氯丙嗪（含量100.0%，批号：100460-200501，中国食品药品检定研究院），甲醇、乙腈、无水乙醇、甲酸（均为色谱纯），盐酸（优级纯），甲基叔丁基醚、甲酸铵、氢氧化钠、磷酸二氢钾（均为分析纯），所用水为超纯水。 　　3方法与结果 　　3.1液相条件色谱柱 Thermo Scientific Hypersil ODS（C18）柱（2.1mm×150mm，5μm）。流动相：A相为0.01mol/L甲酸铵溶液（用甲酸调节pH=4.0），B相为甲醇-乙腈（3：2，v/v），梯度洗脱：0～3min，保持70%A；3～6min，70%A线性变化至40%A；6～16min，40%A线性变化为35%A；16～17min，35%A线性变化为20%A；17～19min，20%A线性变化为70%A，19～30min，保持70%A。流速：0.3mL/min；柱温：35℃；进样量：20？L。 　　3.2质谱条件以三重四极杆质谱仪作为检测器，ESI源，正离子扫描，MRM监测模式。IS：5500.0 V；NEB：12；CUR：8；CAD：6；源温：550℃。定量离子对（m/z 319.3→86.2，CE：29eV）；定性离子对（m/z 319.3→58.2，CE：60eV）；采集时间：200ms；DP：46V；FP：240V；EP：7V；CXP：14.5V。 　　3.3溶液的制备 　　3.3.1样品溶液的制备精密称取2g均匀猪肉样品于50mL聚丙烯离心管中，加入200μL乙腈进行涡流混合，混合后加入400μL 11mol/L氢氧化钠溶液，并进行涡流混合30s。在（80±5）℃水浴中放置1h，在此期间，对每个测试样品进行涡流混合30s 2次。1h后，将样品取出，冷却至室温。加入12mL甲基叔丁基醚，置于振荡器上高速振荡15min，离心15min（4000rpm）。吸出上清液，将上清液转移至50mL聚丙烯离心管中，待净化。 　　在上述50mL聚丙烯离心管中加入2mol/L盐酸3mL，振荡10min，离心10min（4000rpm），弃去甲基叔丁基醚层。加入1mL 11mol/L氢氧化钠溶液，摇匀，加入3mL甲基叔丁基醚，振荡15min，离心5min（4000rpm），吸取甲基叔丁基醚层，用0.22μm微孔滤膜过滤，即得。 　　3.3.2对照品溶液的制备氯丙嗪标准储备液（104.1？g/mL）：精密称取0.01041g盐酸氯丙嗪对照品，置于100mL容量瓶中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；氯丙嗪标准中间液（1.04？g/mL）：精密量取1.00mL氯丙嗪标准储备液于100mL容量瓶中，用