猪圆环病毒猪伪狂犬及仔猪副伤寒混合感染病例分析.docVIP

猪圆环病毒猪伪狂犬及仔猪副伤寒混合感染病例分析 　　2015年9月中旬，河南省驻马店市上蔡县某400头母猪场，体重在35～45kg阶段猪群发生顽固性拉稀、粪便潜血或鲜红。据畜主描述，该场有一栋存栏200多头该阶段猪只，已发病近半个月，发病率在40%，病程持续一周左右即可死亡。发病期间，该场使用过痢菌净、阿莫西林和柴胡注射液，但效果不佳。 　　1 免疫背景 　　该场猪瘟、伪狂犬、蓝耳病、圆环病毒病疫苗均为国产疫苗，母猪按季度普免，商品猪猪瘟断奶前免疫一次，保育后期免疫一次，伪狂犬出生滴鼻，45日龄加强一次，圆环与蓝耳病疫苗均在15日龄免疫一次。 　　2 临床症状 　　发病猪只出现严重的咳嗽、喘气现象，眼结膜潮红，皮肤颜色苍白，膘情差，行走时步履蹒跚。地面清晰可见红色或水泥色粪便，个别严重猪只肛门处粘有红色稀粪。大群猪只打堆，采食量明显下降。 　　3 病理变化 　　对发病猪只处死后解剖可见，皮肤表面有明显铁锈色出血孔，皮下浆膜面有出血斑点，全身各处淋巴结有肿大现象，断面有出血。肠系膜淋巴结呈索样肿大，肺脏膨隆不全，部分肺叶质地坚实，可见因组织增生而形成的灰白色斑块。肝肿胀淤血；胃黏膜脱落、溃疡；肠壁淋巴小结肿胀隆起，突出于肠浆膜和黏膜表面。肾脏肿大，色泽变淡，表面散有灰白色大小不一的病灶。 　　4 实验室检查 　　4.1 主要试剂及培养基 　　引物由上海生工公司合成。动物总RNA快速提取试剂盒购自上海捷瑞生物工程有限公司。基因组RNA反转录试剂盒购自Thermo公司。2XPowerPCR MasterMix（北京百泰克生物技术公司）。DNAMarker（宝生物工程（大连）有限公司）。细菌培养基（杭州天和微生物试剂有限公司）。 　　4.2 引物设计与合成 　　应用PrimerPremier5.0软件，根据GenBank已发表的序列，分别设计猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒引物如下：上游引物：5-CCTGCACCCCGTAGAACTG-3’，下游引物：5-GCGAAACGCCTCGTAAGC-3’。上游引物5-CTCCCTGCGTGGTCTAAG-3’，下游引物：5_GCITCCTCCACTCCCArITG_3’。上游引物：5-ATGGGCATCGCCGACTACCT-3’；下游引物：5- GCCAGAAGAGCTCCCAGTGCA-3’。上游引物：5-GITATCGTATGGCGGGAGG-31；下游引物：5- CCCCTCTCTCCCCrrTGA_3. 　　4.3 细菌分离鉴定 　　采集病死猪的淋巴结、脾脏、肠道内容物接种于营养琼脂和普通肉汤、麦康凯琼脂平板、亚硫酸铋琼脂平板上，37℃培养24h，然后挑取单个菌落涂片、革兰氏染色。 　　在无菌条件下，将分离纯化的细菌，接种于细菌微量生化微反应管中，在37℃下培养24～48h，观察结果。 　　4.4 药敏试验 　　采用琼脂纸片扩增法。将细菌密度为1.5×108cfu/mL的菌液，用灭菌棉拭子蘸取，在营养琼脂平板上均匀涂布，药敏纸片贴到培养基表面，37℃条件下培养16-18h。 　　5 结果与分析 　　5.1 PCR与RT-PCR检测结果（如图1） 　　5.2 分离培养特性 　　在普通营养琼脂上，形成圆形、半透明、光滑、湿润、边缘整齐的灰白色菌落，在麦康凯琼脂形成细小、无色半透明、光滑、圆整菌落，在亚硫酸铋琼脂平板上，呈黑色菌落。取分离菌纯培养物涂片，呈两端钝圆或卵圆形，不运动，不形成芽孢和荚膜的革兰氏阴性小杆菌。 　　5.3 生化试验结果 　　生化试验结果表明，能还原硝酸盐、能利用葡萄糖产气、赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶反应阳性。尿酸酶试验阴性。不发酵蔗糖、水杨苷、肌醇和苦杏仁苷。不发酵阿拉伯糖。 　　5.4 药敏试验结果 　　分离出的猪霍乱沙门氏菌对18种抗菌药的敏感性试验结果（见表1）。 　　6 鉴别诊断 　　1）慢性猪瘟与慢性副伤寒的临床症状有相似地方，容易混淆，但猪瘟皮肤常有小出血点，精神高度沉郁，不食，各种药物治疗无效，病死率极高，剖检时，脾脏不肿大，无坏死灶，但常有出血性梗死，回盲瓣口有纽扣状溃疡，淋巴结出血明显。 　　2）猪痢疾持续性下痢，粪便带血和黏液，呈棕色、褐色或红色。剖检时可见大肠黏膜主要病变是弥漫性出血和坏死，肠黏膜及肠内容物多呈暗红色，涂片染色，可见本病病原体――蛇形螺旋体。 　　3）由弯曲杆菌引起的坏死性肠炎，可见急性肠出血或下痢，剖检可见回肠出血坏死，而大肠病变较轻微，其他脏器无明显变化。 　　7 控制措施 　　建议将病猪与疑似感染病猪与健康猪只隔离，及时将粪便进行清理，并对圈舍进行消毒。病猪注射恩诺沙星，灌服蒙脱石散。紧急接种伪狂犬疫苗，猪群健康状况改善后，添加七清败毒颗粒。