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猪卵母细胞不同孤雌激活方法研究 　　摘要：通过对不同电激活参数的摸索，电激活和化学激活联合的研究，以确定适合于猪卵母细胞孤雌激活的最佳方案。结果表明，体外成熟猪卵母细胞在电场时程６０ μｓ，１次直流脉冲的条件下，电场强度１．６ ｋＶ／ｃｍ时其卵裂率（８８．６８％）和桑葚胚率（８1．１３％）较其他各组高。在电场强度为１．６ ｋＶ／ｃｍ，１次直流脉冲的条件下，脉冲时程２０ μｓ时，卵母细胞卵裂率仅为７５．３８％，桑葚胚率为６４．６２％；４０和８０ μｓ时，卵裂率分别是８４．６２％和７７．１７％；１００ μｓ时，卵母细胞的卵裂率和桑葚胚率都明显下降。在电场强度为１．６ ｋＶ／ｃｍ，电场时程为６０ μｓ的条件下，２次电脉冲激活卵母细胞的卵裂率（８７．５０％）、桑葚胚率（８１．２５％）和１次电脉冲的卵裂率（８８．６８％）、桑葚胚率（８０．１３％）之???无显著性差异（Ｐ?０．０５），但两者均显著高于３次电脉冲的卵裂率（７２．５０％）和桑葚胚率（70．27％）。成熟卵母细胞经电刺激（ＥＳ）后，分别用ＣＢ（７．５ μｇ／ｍＬ）、ＣＨＸ（１０ μｇ／ｍＬ）、6-ＤＭＡＰ（２ ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＣＢ（７．５ μｇ／ｍＬ）＋ＣＨＸ（１０ μｇ／ｍＬ）、ＣＢ（７．５ μｇ／ｍＬ）＋6-ＤＭＡＰ（２ ｍｍｏｌ／Ｌ）各自处理４ ｈ，ＥＳ＋ＣＢ＋ＣＨＸ和ＥＳ＋ＣＢ＋6-ＤＭＡＰ组卵裂率显著高于其他３组，但其桑葚胚率差异不显著。结果显示，电场强度为１．６ ｋＶ／ｃｍ，电场时程６０ μｓ，１次脉冲的电刺激对体外成熟的猪卵母细胞（ＩＶＭ）孤雌激活效果最好；１次或２次电脉冲就足以激活猪卵母细胞，过高脉冲对细胞反而有伤害作用；电激活和化学激活联合应用可提高猪卵母细胞的卵裂率。 　　关键词：卵母细胞；体外培养；孤雌激活；猪 　　中图分类号：Ｑ１３２；S828文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）21－4431-04 　　 　　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｏｏｃｙｔｅｓ 　　 　　ＬＩ Ｌｉ１，ＺＨＥＮＧ Ｘｉｎ－ｍｉｎ１，ＨＵＡ Ｚａｉ－ｄｏｎｇ２，ＬＩＵ Ｘｉ－ｍｅｉ１，ＢＩ Ｙａｎ－ｚｈｅｎ１，ＸＩＡＯ Ｈｏｎｇ－ｗｅｉ１ 　　（１． Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Animal Husbandry and Veterinary， Ｈｕｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅs／Ｈｕｂｅｉ Ｋｅｙ Ｌａｂoratory ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｅｍｂｒｙｏ Engineering and Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ， Ｗｕｈａｎ ４３００６４， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ / Ｇｕｉｚｈｏｕ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， Bｒｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ， Ｇｕｉｙａｎｇ ５５００２５， Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ， ｔｈｅ parameters ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ activation ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ of electrical activation and chemical activation ｏｎ ｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｍａｔｕｒｅｄ ｐｏｒｃｉｎｅ ｏｏｃｙｔｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ to find the best program． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒａｔｅs ｏｆ ｃｌｅａｖａｇｅ ａｎｄ ｍｏｒｕｌａ ｏｆ ｔｈｅ ｏｏｃｙｔｅｓ ｕｓｉｎｇ ｏｎｅ ＤＣ－ｐｕｌｓｅ ｏｆ １．６ kＶ／ｃｍ ｆｏｒ ６０ μｓ （８８．６８% ａｎｄ ８1．１３％） ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ that in ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ． Ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｒａｔｅs ｏｆ ｃｌｅａｖａｇｅ ｉｎ ｏｎｅ， ｄｏｕｂｌｅ ａｎｄ ｔｈｒｅｅ ＤＣ－ｐｕｌｓｅ ｏｆ １．６ kＶ／ｃｍ ｆｏｒ ６０ μｓ ｗｅｒｅ ８８．６８%， ８７．５０% ａｎｄ ７２．５０％， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． And the rates of morula were