镉胁迫对2个宁夏主栽水稻品种幼苗期抗氧化同工酶亚基及其活性影响.docVIP

镉胁迫对2个宁夏主栽水稻品种幼苗期抗氧化同工酶亚基及其活性影响 　　摘要：为探讨2个宁夏主栽水稻品种萌发期、幼苗期对镉（Cd）胁迫的形态、生理生化响应，明确Cd污染对水稻的伤害机理，并为早期检测提供理论依据，以富源4号、宁梗28号为研究对象，于人工气候室内培养，设置3个Cd处理浓度（0、50、100 μmol/L），研究不同处理对水稻发芽率、胚芽鞘长度、胚根数、主根长的影响以及根系中活性氧类（ROS）的累积和细胞凋亡情况；采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术分析Cd对4种抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）]同工酶亚基的影响。结果显示：（1）Cd毒害使根系产生大量活性氧类而诱导根尖伸长区细胞死亡，从而抑制了2个品种主根生长，但却使根数增加；（2）100 μmol/L Cd抑制了富源4号SOD同工酶亚基，导致SOD总活性下降，CAT活却显著性增强；（3）宁梗28比富源4号有较强的耐受Cd的能力。分析结果可知：胚根数的增加是宁夏水稻耐受Cd胁迫的重要措施；Cd胁迫下的SOD活性以及SOD同工酶亚基是可以用来鉴定水稻受重金属胁迫的一个重要的生理伤害指标；CAT对Cd 胁迫下的水稻起重要的抗氧化保护作用。 　　关键词：Cd胁迫；水稻；同工酶；活性氧（ROS）；细胞凋亡 　　中图分类号： S511.01 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2016）07-0107-06 　　水稻是宁夏平原引黄灌溉区的主要粮食作物之一，也是宁夏平原重要的经济作物，大面积种植的水稻品种有宁梗系列、富源4号等[1]。但是，随着黄河沿岸经济的迅速发展，含有重金属污染物的工业废水被排入黄河，导致黄河水质不断恶化，重金属污染成为沿黄区水稻种植面临的重要问题，尤其是重金属镉（Cd）作为生物毒性极强的元素，不但在土壤中的化学活性大，而且移动性强、毒性持久。水稻是一种极易富集Cd的农作物，可以将Cd累积在籽粒部位，通过食物链的传递进入人体。“镉米”严重危及人体健康，能够致病、致癌、致病变。因此，污染区稻米产品的安全性一直受到重视[2-3]。 　　目前，关于水稻对Cd的吸收积累途径、Cd在水稻中的分布规律，及Cd对水稻生长发育的毒害机理等方面已有大量的报道[4-7]，Cd对水稻的生态生理效应趋于成熟。而有研究表明，不同品种的水稻对Cd的耐受性及累积性有显著差异[4]，种子萌发期既是水稻生活周期的起点，也是水稻感知外界环境的最初生命阶段，水稻种子萌发时期的生长状况直接影响水稻后期的发育和产量。目前，关于Cd在水稻生活周期不同发育阶段的效应，尤其是宁夏主栽水稻品种对重金属Cd响应方面的研究鲜有报道。笔者以宁夏主栽水稻品种宁梗28号、富源4号为研究对象，研究Cd胁迫对这2个品种的萌发率、胚芽鞘长度、主根数、根系中活性氧类（ROS）累积、根系凋亡以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）同工酶的影响，旨在探讨重金属胁迫对宁夏主栽水稻抗氧化同工酶基因表达的影响以及水稻在重金属胁迫下的抗性差异，为揭示Cd对宁夏主栽水稻品种毒害的生理机理及保障粮食安全和监测重金属污染提供理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　以宁夏主栽水稻品种富源4号、宁梗28号为试验材料，种子购于宁夏贺兰县种子公司。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 水稻的萌发与处理 挑选大小一致、颗粒饱满的当年产水稻种子，先用蒸馏水冲洗干净，后用10%次氯酸钠溶液浸泡消毒10 min，再用蒸馏水冲洗5次，于25 ℃蒸馏水中浸种4 h，让种子充分吸胀。取直径12 cm、铺有2层消毒滤纸的培养皿，将种子铺于其中，每个培养皿中均匀摆放30粒种子。对照组（CK）即非胁迫处理，每天加入10 mL灭菌水；Cd处理1每天加入10 mL 50 μmol/L Cd，处理2每天加入10 mL 100 μmol/L Cd，每个处理重复3次。将对照与各处理放置于人工气候箱中黑暗培养，温度28 ℃，湿度40%，注意通风。 　　1.2.2 种子萌发指标的测量 发芽期间，每天定时记录萌发数（以种子露白为发芽标准），萌发2 d开始测量胚芽鞘长度（mm），每次随机挑选15粒进行测量，计算平均值。发芽率（GR）即培养3 d时发芽种子数占种子总数的比例（%），萌发5 d后移栽至1/2 Hoagland培养液中，处理浓度不变。 　　1.2.3 可溶性总蛋白的提取及同工酶电泳 待幼苗生长至10 cm时，各称取0.5 g幼苗样品，在冰浴条件下在样品中加入 2 mL 酶提取液[0.1 mol/L Tris-HCl缓冲液，pH值8.0（每100 mL含0.073 g半胱氨酸、0.105