镉胁迫对海菜花种子萌发及幼苗初期生理生化影响.docVIP

镉胁迫对海菜花种子萌发及幼苗初期生理生化影响 　　摘要：通过营养液培养法，研究Cd2+对海菜花种子萌发及幼苗初期叶绿素含量、抗氧化酶活性及可溶性蛋白质含量的影响。结果表明，各浓度（0.1～2.0 mg/L）Cd2+处理抑制海菜花种子的萌发，但与对照无显著差异（P0.05）；海菜花种子的发芽势、发芽指数、活力指数整体随Cd2+处理浓度的增大而下降，当Cd2+处理浓度较高时，与对照差异显著（P0.05）。Cd2+胁迫明显降低海菜花叶片中叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素含量，且与对照差异显著（P0.05）。随着Cd2+浓度增大，超氧化物歧化酶（SOD）活性、过氧化物酶（POD）活性、可溶性蛋白质含量先升高后降低；过氧化氢酶（CAT）活性呈持续降低趋势，且与对照差异显著（P0.05）。随Cd2+胁迫浓度增大，其对海菜花的毒害作用增强。 　　关键词：镉胁迫；海菜花；萌发；叶绿素；抗氧化酶系统；可溶性蛋白质；毒害 　　中图分类号： X522 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2016）11-0482-03 　　在云贵高原分布有我国特有的三级重点保护高原淡水植物海菜花（Ottelia acuminata var. acuminata），其对水质要求很高，对水生生态系统具有重要的生态指示作用。由于人类活动的增强，工业“三废”排放，农业化肥、农药等的大量使用和城市垃圾的肆意堆放，使生态系统中的重金属污染日益加剧[1]，导致海菜花数量急剧减少，而重金属对海菜花种子发芽的毒害作用还鲜见报道。本研究选用毒性较强，且在贵州省具有较高土壤背景值[2]的Cd2+为代表，研究重金属Cd2+对海菜花种子萌发和幼苗生长初期生理生化的影响，以期初步揭示Cd2+对海菜花的生态毒理效应。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　供试海菜花种子采自贵州省贵阳市花溪区花溪水库下游花溪河段，挑选籽粒饱满、大小均匀的种子用于试验。CdCl2?2.5H2O 购自国药集团上海化学试剂公司，各分析纯、生化纯试剂都用超纯水配制。 　　1.2 试验设计 　　用CdCl2?2.5H2O（分析纯）和1/10浓度Hoagland营养液，分别配制0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L Cd2+处理液，分别将等体积的该处理液置于铺有2层滤纸、直径9 cm的培养皿中，分别挑选饱满的海菜花种子各20粒平铺于滤纸上，盖好玻璃培养皿，置于温度（25±1） ℃、光照度2 000 lx、14 h/d、湿度80%的人工气候培养箱中进行萌发试验，每个处理3次重复。每天添加适量的超纯水补偿蒸发的水分，保持滤纸湿润但不淹水。以胚根露出种皮时记录为发芽种子[3]，培养14 d后测定叶绿素、类胡萝卜素、可溶性蛋白质含量，同时测定超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性。 　　1.3 分析方法 　　1.3.1 发芽指标计算方法 发芽指标计算方法如下： 　　发芽率（GR）=14 d内正常发芽的种子数/供试种子数×100%； 　　发芽势（GP）=萌发前7 d发芽数之和/供试种子数×100%； 　　发芽指数（GI）=∑（Gt/Dt）。 　　式中：Gt为第t天的发芽数；Dt为相应发芽时间。 　　活力指数=GI×S。 　　式中：S为幼苗平均总长度[4]。 　　1.3.2 叶绿素、类胡萝卜素含量测定 取各处理幼苗，用80%丙酮溶液提取，用分光光度计测定提取液在665、649、470 nm处的吸光度[5]。 　　1.3.3 SOD、POD、CAT活性和可溶性蛋白质含量的测定 取各处理幼苗，加入少量0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH值7.8），置冰浴研磨匀浆，4 ℃、12 000 r/min离心15 min，上清液用于酶活性和可溶性蛋白含量的测定。SOD活性的测定采用NBT光化还原法[5]，POD活性的测定采用愈创木酚法[5]，CAT活性的测定采用南京建成科技有限公司CAT试剂盒测定，可溶性蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝G-250法[6]。 　　1.4 数据处理与分析 　　用SPSS 13.0软件对试验数据进行统计分析，显著性水平设置为0.05水平；用Origin 2015软件绘制变化趋势图。 　　2 结果与分析 　　2.1 镉胁迫对海菜花种子发芽的影响 　　如表1所示，在试验浓度范围内，Cd2+胁迫对海菜花种子发芽率具有一定抑制作用，但与对照无显著差异（P0.05）；不同Cd2+胁迫下海菜花种子发芽势、发芽指数、活力指数的变化趋势类似，整体表现出随Cd2+处理浓度的增大呈下降趋势，当Cd2+处理浓度较高时，其发芽势、发芽指数、活力指数与对照差异显著（P0.05）。 　　2.2 镉胁迫对海菜花幼苗生长的影响 　　从表2