DNA损伤与修复突变教学课件.ppt

真核细胞的碱基切除修复 核苷酸切除修复 NER最初的切点是损伤部位附近的3′,5′-磷酸二酯键，主要用来修复因UV、丝裂霉素 C和顺铂等因素造成的比较大的损伤，如嘧啶二聚体、6-4光产物或体积较大的碱基加合物以及链间交联等导致DNA结构发生扭曲并影响到DNA复制的损伤，此外，约20%碱基的氧化性损伤也由它修复。在修复过程中，损伤以寡聚核苷酸的形式被切除。由于NER识别损伤的机制并非针对损伤本身，而是损伤对DNA双螺旋结构造成的扭曲，因此，NER能够使用相同的机制和几乎同一套修复蛋白去修复一系列性质并不相同的损伤。 NER在所有的生物具有相同的步骤： 识别损伤—由特殊的蛋白质完成，并由此引发一系列的蛋白质与受损伤DNA的有序结合； 切除损伤—特殊的内切酶在损伤部位的两侧切开DNA链，随后两个切口之间带有损伤的DNA片段被去除； 修复合成—DNA聚合酶以另外一条链为模板，合成已被切除的序列； 缝合切口—由DNA连接酶催化。 两类碱基切除修复-全局性基因组NER和转录偶联性NER 全局性基因组NER负责修复整个基因组的损伤，速度慢，效率低。 转录偶联性NER专门负责修复那些正在转录的基因在模板链上的损伤，速度快，效率高。 两类NER的主要差别在于识别损伤的机制上，至于损伤识别以后发生的修复反应并无本质上的不同。TCR由RNA聚合酶识别损伤，当RNA聚合酶转录到受损伤部位而前进受阻的时候，TCR系统即被起动。 全局性NER和转录偶联性NER 受到ATP水解的驱动，2个UvrA与1个UvrB形成三聚体复合物 （UvrA2UvrB1）； 该复合物与DNA随机结合后，沿着DNA链移动，以探测损伤的位置。 识别损伤的过程比较缓慢，为GGR系统的限速步骤。 当遇到嘧啶二聚体时，通过水解ATP，造成损伤部位的DNA双螺旋发生局部解链和进一步弯曲，致使UvrB与损伤部位形成更紧密的接触； UvrA在ATP水解后离开复合物，留下UvrB横跨损伤部位； 大肠杆菌的核苷酸切除修复 UvrC被UvrB招募到损伤部位后激活UvrB的核酸内切酶活性，UvrB在距离嘧啶二聚体的下游4nt的位置切开DNA链； 与此同时，UvrC的核酸内切酶活性被UvrB激活，在距离嘧啶二聚体的上游7nt的位置切开DNA链； 于是，产生一个长达13nt的含有嘧啶二聚体的寡聚核苷酸片段。 大肠杆菌的核苷酸切除修复 在解链酶UvrD的作用下，ATP被水解，包含嘧啶二聚体的DNA片段发生解链而离开双螺旋，UvrC也随之而去； 最后，DNA聚合酶I或II填补空缺； DNA连接酶则缝合切口。 大肠杆菌的核苷酸切除修复 转录偶联性核苷酸切除修复 哺乳动物细胞的全局性NER和转录偶联性NER 错配修复 （MMR） MMR系统主要用来修复DNA分子上错配碱基对，此外，还能修复一些因“复制打滑”而诱发的核苷酸插入或缺失损伤。 错配修复系统必须能够保证只会将子链上错误的碱基切除，而不会把母链中本来就正确的碱基切除。大肠杆菌的MMR系统的确就是利用甲基化来区分子链和母链的，因此，大肠杆菌内修复复制中产生的错配碱基的系统又称为甲基化导向的错配修复。至于其它细菌和真核细胞如何区分子链和母链的尚不清楚。 参与错配修复的蛋白质和酶的名称和功能 大肠杆菌 酵母 哺乳动物 大肠杆菌中蛋白质的功能 MutS Msh2,Msh6,Msh3 Msh1（线粒体） Msh4，Msh5 （减数分裂重组） Msh2,Msh6,Msh3 不明 Msh4，Msh5 （减数分裂重组） 识别错配碱基，具有弱的ATP酶活性。 MutL Mlh1 Pms1 Mlh2,Mlh3 Mlh1 Pms2 Pms1 调节MutS和MutH之间的相互作用，与UvrD作用。 MutH 不明 不明 结合半甲基化的GATC位点，序列和甲基化特异性内切酶，剪切非甲基化GATC的5′-端。 UvrD 不明 不明 解链酶II，催化被切开的含有错配碱基的子链与母链的分离。 大肠杆菌MMR作用的主要步骤 （1）首先由MutS识别并结合除了C-C以外的错配碱基对，MutL随后结合；（2）在错配碱基对两侧的DNA通过MutS作相向移动；（3）MutH与MutL和GATC位点结合；（4）MutH的核酸内切酶活性被MutS/MutL激活，在非甲基化GATC的5′-端切开子链；（5）UvrD作为解链酶，催化被切开的含有错配碱基的子链与母链的分离，SSB则与母链上处于单链状态的区域结合，特殊的外切酶将游离出来的含有错配碱基的单链DNA进行水解。如果MutH的切点在错配碱基的3′-端，将由外切核酸酶I或X从3′→5′方向水解。如果MutH的切点在在错配碱基的5′-端，则由外切核酸酶VII和 RecJ 来降解；（6）最后，DNA聚合酶III和连接酶分别进行缺口的修