饲料中添加中性蛋白酶对吉富罗非鱼生长和消化功能影响.docVIP

饲料中添加中性蛋白酶对吉富罗非鱼生长和消化功能影响 　　摘 要：在吉富罗非鱼（Oreochromis niloticus）基础饲料中添加中性蛋白酶，添加量分别为0.00%、0.05%、01%、0.15%、0.2%和0.25%，研究添加后对吉富罗非鱼生长和消化功能的影响。结果表明，在饲料中添加0.1%～0.25%的中性蛋白酶，吉富罗非鱼的相对增重率和特定生长率显著提高，饲料系数显著降低（P005）；添加0.1%～0.2%的中性蛋白酶，显著提高饲料干物质表观消化率和粗蛋白表观消化率（P005）；添加量为0.1%～0.15%时，肝胰脏蛋白酶显著高于对照组（P0.05），添加量为0.15%时，肠道蛋白酶活性显著提高（P0.05）。综合鱼体相对增重率、特定生长率、饲料系数、消化器官消化酶活性等各项指标，吉富罗非鱼饲料中中性蛋白酶的添加量以饲料的0.1%～0.2%为宜。 　　关键词：吉富罗非鱼（Oreochromis niloticus）；中性蛋白酶；生长；表观消化率；消化酶 　　目前在水产养殖中，对酶制剂的活性研究较多[1-2]，而对水产动物的生长性能和消化率研究的相对较少。与此同时，酶制剂品种很多，数量多达20余种，但常用的只有少数几种。在国外，木聚糖酶用量最大，其次是β-葡聚糖酶，其它几种酶制剂使用相对较少。近几年国内在非淀粉多糖酶和复合酶制剂的研究较多[3-5]，但对于饲料中添加外源性消化酶的研究较少。本文通过在鱼粉含量较低而植物蛋白较高的吉富罗非鱼饲料中加入中性蛋白酶，进行饲养试验，研究中性蛋白酶对吉富罗非鱼（Oreochromis niloticus）的生长、表观消化率及消化酶活性的影响，旨在探讨中性蛋白酶在吉富罗非鱼饲料中的应用效果和适宜的添加量。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验饲料 　　在基础饲料中分别加入不同浓度（0、0.05%、0.1% 、0.15%、0.2%、0.25%）的中性蛋白酶（活性50 000 U/g）配成试验饲料，每组3个平行。试验饲料制备时准确称取相应质量的中性蛋白酶与黏合剂（红薯淀粉）混合，加入少量蒸馏水，搅匀后均匀喷洒到基础饲料上，自然风干分装，在常温下避光保存备用，每次拌料以5 d左右的投喂量为宜。 　　1.2 ?验条件 　　所用水族箱规格为110 cm×60 cm×80 cm，为自动循环水养殖系统。试验用鱼平均体重为（92.65±4.84）g/尾。 　　1.3 饲养管理 　　采用循环水养殖，根据水质情况适当换水。试验期间每天投饵2次，投饵时间分别为8：00和16：00。每天的投喂量相对稳定，各水族箱间投饵量也相对稳定，每次投喂以10 s时间吃完没有残饵为宜。全天24 h不间断充气。试验期间水温保持在 25～30 ℃，pH为 7.0～7.5。随时观测鱼的活动、摄食情况，发现病鱼，及时进行检查，分析原因，采取相应的治疗措施。 　　1.4 生长指标的测定 　　试验开始前，对每个水族箱中的吉富罗非鱼分别进行计数、称重。饲养56 d后，停食24 h，对每组水族箱中所剩吉富罗非鱼进行计数、称重，空腹测定各组水族箱中吉富罗非鱼终末体重，计算各试验组吉富罗非鱼的试验初尾均重、试验末尾均重、成活率、相对增重率、特定生长率和饲料系数。 　　1.5 饲料消化率的测定 　　饲料消化率采用水产动物表观消化率测定方法（NY/T 2713-2015）。采用逐级稀释的方法提前将Cr2O3混匀后均匀地加入到吉富罗非鱼配合饲料中，添加量为1%。使用的Cr2O3为化学纯，研碎后经过100目筛。计算出饲料干物质表观消化率、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维的表观消化率。 　　1.6 吉富罗非鱼消化器官消化酶活性的测定 　　1.6.1 消化器官样品的采集及酶液的制备 消化器官样品的采集：饲养试验结束后，投喂试验饲料2 h左右，在每个处理组中分别随机捞取3尾吉富罗非鱼，将3尾吉富罗非鱼解剖的肝胰脏样品混合成一个样品、将解剖的3个肠道样品混合成一个样品。操作如下：将吉富罗非鱼从水簇箱中捞出，立即解剖，分别取出肝胰脏和肠道，放在有冰浴的培养皿上，此操作需在0～4 ℃条件下进行。分别剪除吉富罗非鱼肝胰脏、肠道外壁或表面上的脂肪，用滤纸沾去肝胰脏、肠道上的血块。 　　组织匀浆酶液的制备：取出肠道的内容物，用4 ℃的冷却蒸馏水将肠道内壁冲洗干净，再用洁净的滤纸将肠道样品表面水分吸除，然后用解剖剪将肠道剪碎，在分析天平上进行称重（精确至0.01 g以上），将剪碎的肠道组织放入玻璃匀浆器中，加入适量4 ℃的冷却蒸馏水，在冰浴中对肠道组织进行匀浆，再用4 ℃的冷却蒸馏水将肠道组织匀浆液冲冼至离心管中，3次所用冷却蒸馏水的重量为吉富罗非鱼肠道样品重量的10倍。然后在4 ℃条件下以6 000 r/min的转速将肠道组织匀浆液离心1