高糖对体外培养人脐静脉内皮细胞中cfos影响研究.docVIP

高糖对体外培养人脐静脉内皮细胞中cfos影响研究 　　【摘要】 目的 观察高糖作用人脐静脉内皮细胞时c-fos基因mRNA和蛋白的表达的变化。方法 提取并体外培养人脐静脉内皮细胞,分别加入不同浓度葡萄糖(5.5 mmol/L、11 mmol/L、22 mmol/L、44 mmol/L)并分别作用不同时间,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测c-fos基因mRNA的表达,免疫细胞化学检测c-fos蛋白表达。结果 经高糖处理的人脐静脉内皮细胞中,c-fos基因mRNA的转录水平明显高于对照组(P0.05或P0.01)。但是脐静脉内皮细胞经22 mmol/L葡萄糖作用1 h,c-fos基因的mRNA水平不再升高,而呈下降趋势(P0.05)。经22 mmol/L葡萄糖作用2 h后,c-fos蛋白表达达到最高峰。结论 高糖能引起脐静脉内皮细胞c-fos mRNA和蛋白表达增高。 　　【关键词】 葡萄糖;内皮细胞;c-fos;基因 　　 　　High glucose induced c-fos expression in HUVECs in vitro 　　 　　LIU Xiao-peng,MENG Xiao-jun, GUO Yang-bin.Endocrinology Department, The Second Hospital of Zhuhai City, Zhuhai 519000, China 　　 　　【Abstract】 Objective To observe the transcript and protein expression levels of the c-fos in human umbilical vein endothelial cells cultured with high glucose in vitro. Methods Human umbilical vein endothelial cells were cultured in vitro with glucose at different concentrations or for different cultural time respectively. The transcript levels of c-fos was measured by RT-PCR. The protein expression of c-fos was detected with immunocytochemistry. Results The transcript and protein expression levels of c-fos in high glucose groups were higher than those of control group (P0.05 or P0.01). Cultured with glucose at 22 mmol/L, the transcript of c-fos mRNA increased in 1 h, the protein expression of c-fos reacheol the summit aftertwo hours,and then began to decrease(P0.05). Conclusions The transcript and protein expression of c-fos gene increase in HUVECs, cultured with high glucose. 　　【Key words】 Glucose; Endothelial Cells; c-fos; Gene 　　 　　作者单位:519000珠海市第二人民医院内分泌科(刘小鹏);中山大学第五附属医院内分泌科(孟晓军),儿科(郭杨彬) 　　 　　糖尿病大血管病变是糖尿病常见的严重慢性并发症之一,血管内皮细胞的功能紊乱和损伤是其中一个重要的因素。c-fos是细胞内的一种癌基因,其表达产物Fos 和Jun能形成异源二聚体,即有活性的转录因子AP-1,调节基因的表达和蛋白质的合成,从而参与细胞增殖、凋亡等过程。国内外研究表明糖尿病时c-fos原癌基因参与了糖尿病大血管病变的病理生理过程,但c-fos原癌基因在血管内皮细胞表达情况极少见报道。本实验的主要目的是观察在高糖培养条件下,人脐静脉内皮细胞中c-fos mRNA和蛋白的表达变化情况,为糖尿病的临床和基础研究提供有益的探索。 　　1 材料 　　新生儿脐带:来自中山大学第五附属医院妇产科健康产妇,无菌操作取下脐带,置PBS溶液中浸泡,4℃冰箱保存,于4 h之内使用;DMEM培养基(低糖型)、胎牛血