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鸭胚肾细胞用于鸭肝炎弱毒增殖研究 　　摘要：为分析鸭胚肾细胞用于鸭肝炎病毒增殖的可能性，从鸭胚肾细胞的制备、体外培养、鸭肝炎弱毒在鸭胚肾细胞中的增殖等方面入手，初步分析了鸭胚肾细胞体外培养和用于鸭肝炎病毒增殖的可行性。结果表明，鸭胚肾细胞能够体外培养并形成良好的细胞单层，形态多为多边形或梭形；原代鸭胚肾细胞可以用于增殖鸭肝炎弱毒A66株，毒价（ELD50）达10-4.2/0.2 mL。说明鸭胚肾细胞适合用于鸭肝炎病毒的增殖，有望用于鸭肝炎病毒疫苗的生产。 　　关键词：鸭胚肾细胞；体外培养；鸭肝炎弱毒 　　中图分类号：S852.65；S858.32 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）16-3983-03 　　DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.16.038 　　Proliferation of Attenuated Duck Hepatitis Virus in Duck Embryo Kidney Cells 　　LU Shun， GAO Qi-shuang，LIU Wu，CHEN Zhi-hua，ZHOU Li，ZHAN Cai-yao，TONG WEI-wen， 　　TAO Bi-fei，XIA Yu，WANG Lian-fang，HUA Juan 　　（Wuhan Institute of Animal and Veterinary Science， Wuhan 430208， China） 　　Abstruct：In this study the possibility of proliferation of duck hepatitis virus in duck embryo kidney cell were analyzed through the preparation of duck embryo kidney cell， cultured in vitro and the proliferation of duck hepatitis virus in the cell. The results showed that duck embryo kidney cell could be cultured in vitro； most of the cells were polygonal or fusiform. Duck embryo kidney cell could be used in proliferation of attenuated duck hepatitis virus A66， and the virus titer could reach 10-4.2/0.2 ml （ELD50）. It indicated that duck embryo kidney cell was suitable for duck hepatitis virus proliferation and might be used to produce vaccines. 　　Key words：duck embryo kidney cell； in vitro cultivation； attenuated duck hepatitis virus 　　近年来，鸭病毒性肝炎在中国水禽养殖区广泛流行，给养鸭业带来了巨大的威胁。鸭病毒性肝炎由鸭肝炎病毒（DHV）引起，主要危害3周龄以内的雏鸭，病死率可达100%[1]。已报道的鸭肝炎病毒有3个血清型，即Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型。中国已发现Ⅰ型和Ⅲ型鸭肝炎病毒，其中流行的主要是Ⅰ型[2]。目前尚无治疗鸭病毒性肝炎的特效药物，接种鸭肝炎疫苗是预防和控制该病的最经济且行之有效的方法。 　　在国内，鸭肝炎疫苗的生产还主要依靠传统的鸡胚培养技术[3]，使用细胞生产鸭肝炎病毒疫苗尚处在研究阶段，暂时还没有细胞源的鸭肝炎病毒疫苗上市销售。相比鸡胚培养技术，细胞培养病毒具有周期短、质量易控制和抗原纯度高等优点[4]，因此使用细胞生产鸭肝炎病毒疫苗是未来的发展方向。这也使得寻找适合培养鸭肝炎病毒的细胞成为研究的热点。目前，已报道用于培养鸭肝炎病毒的细胞系主要是鸡胚或鸭胚成纤维细胞系，关于其他细胞的研究较少。因此，寻找新的适合于鸭肝炎病毒增殖的细胞，能为鸭肝炎病毒及其疫苗的研究工作提供新的细胞材料。本研究旨在探索鸭胚肾细胞用于鸭肝炎病毒增殖的可能性，为鸭肝炎病毒的研究和疫苗生产提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 培养基及主要试剂 　　DMEM高糖培养基（粉剂）和胎牛血清购自GIBCO公司；双抗（青霉素、链霉素混合液，100×）、胰蛋白酶购自Sigma公司；其他化学试剂均为分析纯。 　　1.2 毒株