魔王谷稻瘟病抗性遗传分析和基因定位.docVIP

魔王谷稻瘟病抗性遗传分析和基因定位 　　摘要：采用田间自然诱发鉴定法，对持久抗病品种魔王谷和感病品种鄂晚8号的DH系和F2∶3家系进行了抗性遗传分析和基因初步定位，并使用NBS-LRR同源序列引物进行了抗性基因的筛选，揭示魔王谷的抗病机理。结果表明，两个群体的穗瘟田间抗性由第12染色体RM512标记下游的一对隐性主效基因控制，并在Chr11的RM224下游、Chr7的RM248下游等染色体区间存在多个QTLs。NBS-LRR基因序列的筛查也表明在Chr12、Chr8、Chr6、Chr11对应区间的基因与抗性相关度较高。 　　关键词：稻瘟病；持久抗性；基因定位；NBS-LRR同源序列 　　中图分类号：Q37；Q341 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）22-5346-05 　　由子囊菌引发的水稻稻瘟病是水稻生产中最严重的病害。据统计，全球每年由稻瘟病造成的稻米产量损失足以养活6 000万人以上，我国稻瘟病年发病面积约3.8×106 hm2，发病面积占水稻种植面积的6%，年损失稻谷约1×109 kg，稻瘟病已成为水稻高产稳产的严重障碍[1，2]。稻瘟病的防治主要采用化学防治和抗病新品种培育两种途径，化学防治成本高、效果差且污染环境，选育和推广抗病水稻品种被认为是控制稻瘟病害最安全、经济和环保的方法。 　　截至2013年8月，至少报道了68个抗稻瘟病位点的83个主效抗性基因[3]。报道和鉴定了较多持久抗瘟性水稻品种，如Moroberekan、Tetep、OS6、Dourode Perecose、IR36、IR42、IR64以及小粒野生稻、密阳30、湘资3150、天津野生稻、魔王谷、谷梅2号等[4-7]。品种范围涉及古老的地方品种、栽培稻品种和野生稻。这些抗源品种在稻瘟病的抗病育种中发挥着重要作用。由于稻瘟病菌容易出现新的生理小种，使得小种专化抗性丧失，多数抗病品种在推广种植3～5年后会出现感病，逐渐丧失抗病性[8，9]。因此，延长水稻品种的稻瘟病抗性周期成为当前水稻抗性育种的主要任务，而开展广谱、持久抗性的水稻育种是解决稻瘟病危害最有效且最环保的途径。 　　魔王谷的持久稻瘟病抗性前人已有报道，本研究采用田间自然发病的方式，鉴定家系材料的抗病表型，通过构建抗病品种魔王谷与感病品种鄂晚8号的DH系和F2∶3群体，分析魔王谷的抗性遗传。SSR标记群分法与NBS-LRR同源基因比较结合，对抗病基因所在区间进行了初步定位。本研究旨在探求广谱、持久抗病的遗传基础，为抗病基因的精细定位和克隆以及育种利用提供依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　魔王谷为云南稻区的地方品种，高抗稻瘟病，本试验中作为抗源；鄂晚8号为湖北省农业科学院育成的优质晚粳品种，高感稻瘟病；9311为江苏里下河地区农业科学研究所育成的优质中籼品种，高感稻瘟病。 　　1.2 群体构建 　　2007年以魔王谷为父本，与鄂晚8号配制杂交组合， F1代植株取花药进行花药培养， 得到加倍单倍体（DH系）植株113株， 海南移栽并收获单株种子。 　　按照单粒传原则，收获“鄂晚8号/魔王谷”组合 F1单株种子，于海南种成F2群体，分单株收获种子，得到F2∶3家系。2008年春将DH系和F2∶3家系两个群体在恩施两河病圃栽种。 　　2009年夏在武汉以魔王谷为父本，与9311配制F1杂交组合，再以9311为轮回亲本，通过2次回交和自交，构建BC2F3回交渗入系。2012年将263个BC2F3家系在宜昌远安病圃种植。 　　1.3 田间抗性鉴定和遗传分析 　　种子4月初播种，5月初移栽大田，每份家系材料栽插20苗，水肥管理同当地水平，防虫不防病。分蘖期调查叶瘟的发病率、病级，抽穗后调查穗瘟损失率、穗瘟病级、发病率等指标。按照叶瘟病级分为1-9级，穗瘟病级按0、1、3、5、7、9级进行统计。将发病数据制成次数分布表，进行遗传推断。 　　1.4 叶片DNA提取 　　选取水稻植株叶片组织，采用CTAB法提取水稻基因组DNA。 　　1.5 引物筛选、设计与合成 　　采用水稻12条染色体上460对SSR引物进行抗、感亲本间差异标记的筛选，获得的差异标记进行连锁标记分析。抗病同源基因引物序列参考Shang等[10]发表的36对Psudogene引物进行序列设计。所有引物由上海生物工程公司合成。 　　1.6 基因定位 　　基因分型以魔王谷作为抗病对照，鄂晚8号作为感病对照。采用群分法（Bulked segregant analysis， BSA），用SSR引物进行主效抗性基因的初步筛选，选取DH家系中高抗（穗瘟抗级为0级）和高感（穗瘟抗级为9级）的家系各9个，分别组成抗、感小群体。利用在魔王谷与鄂晚8号间的多态性SSR引物进行连锁标