第2章细胞工程研究常用设备和技术课件.ppt

八、培养箱 细胞在离体培养时，都需要一定的温度，尤其是哺乳动物细胞的要求较高，在多数情况下温度变化不能超过±0.5℃。 动物细胞培养 恒温培养箱包括能控制和调节温度的一般培养箱为增加了湿度和CO2调节的二氧化碳培养箱。 植物细胞培养 增加了照明条件的光照培养箱、人工气候箱。 九、显微镜 体视显微镜（解剖镜）：用于观察和剥离较小器官和组织，也可用来观察愈伤组织的生长和发育。 透射显微镜：物镜在载物台上方，用于观察切片、压片、涂片等。 倒置显微镜：物镜在载物台下方，可以从培养皿、培养瓶或摇瓶的下方观察培养物，用来实时观察活细胞的生长情况。 显微操作系统：用于对细胞进行显微操作，如细胞核移植、染色体操作、显微注射、胚胎切割等工作。 第三节 基本技术 1．洗涤液 铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成，可根据需要配制成弱、中、强三种。 一、洗涤技术 弱 用重铬酸钾50g加入蒸馏水1L，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸90ml。 中 用重铬酸钾50g加入蒸馏水100ml，加热溶化，冷却后再缓慢加入浓硫酸875ml。 强 浓硫酸加热的同时缓慢加入磨碎的重铬酸钾，直到重铬酸钾达到饱和为止。一般浓硫酸1L加入重铬酸钾50g。 玻璃器皿洗涤 塑料用品洗涤 金属用品洗涤 2．洗涤方法 不同材料的器械，洗涤方法不同。 * * * 第二章 细胞工程研究常用设备和技术 实验室设计 实验室常用仪器设备 基本技术 培养基及其配制 主要内容 细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：实验准备，包括培养基配制，洗涤与灭菌等；无菌操作；控制培养。 第一节、实验室设计 一、基本实验室 准备室：准备室的功能就是进行一切与实验有关的准备工作。要求宽敞明亮，通风条件好。 接种室：接种室的功能是进行无菌操作。要求封闭性好，干燥清洁，能较长时间保持无菌。房间一般不宜过大，其规模根据实验需要而定。接种室除了出入口和通气口外，其余应密闭。 培养室：培养室的功能是对离体材料进行控制培养。其首要要求是要能控制光照和温度，其次为防止微生物感染，培养室应保持干燥和清洁。 基本实验室-培养室 二、辅助实验室 细胞学实验室：其功能是对培养材料进行细胞学鉴定和研究。要求清洁、明亮、干燥，使各种光学仪器不受潮湿和灰尘污染。 摄影室及暗室：其功能是进行培养材料的摄影记录和胶片冲印。在有条件的情况下可建立此实验室。 生化分析室：在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。 细胞工程实验室布局的其基本要求是：便于隔离、便于操作、便于灭菌、便于观察。 第二节 实验室常用仪器设备 一、水纯化装置 用于细胞工程的培养基和其他溶液一般都要用双蒸水或三次蒸馏水来配置。 实验室常用的纯水装置：不锈钢蒸馏水器、石英自动纯水蒸馏器、超纯水装置。 不锈钢蒸馏水器 主要由多个过滤部件组成。水先经过预过滤层除去粗杂质，然后经过有机层、去离子层、去热原层，再经过0.22微米滤膜过滤除菌，得到超纯水。 超纯水装置 二、超声波清洗器 超声波清洗功能主要是利用超声波在液体中的“空化”作用，使黏附在物体表面的各类污物剥落，同时超声波在液体中又能加速溶解作用和乳化作用，再加上合适的清洗剂配合，就可以达到清洗目的。 超声波清洗效果好、速度快，尤其对于采用一般常规清洗方法难于达到清洁度要求，以及手工清洗解决不了的缝隙、小孔、内腔等。 三、蒸汽压力消毒器 实验室中最常用的灭菌设备就是高压蒸汽灭菌器。常见的有立式、卧式和手提式几种。 基本操作步骤： 向锅内注水到规定刻度，注意保持导气管通畅； 将待灭菌物放入锅内，盖紧锅盖； 通电加热，排放冷气； 加热至压力额定值，开始计时； 计时结束，切断电源，自然降压至接近零； 灭菌器盖微开5 min，取出灭菌物； 四、干热灭菌干燥箱 用于器械和玻璃器皿的干热灭菌或烘干。 使用方法如下： 将待灭菌物放入箱内，注意不要放得太挤，以利空气流通； 关箱门，接通电源，打开开关，旋动恒温调节器至指定温度。若需鼓风，则应与升温同时开始，不能先升温后鼓风，以免导致起火或玻璃器皿破裂； 温度上升至指定温度后，维持所需的时间； 灭菌或烘干完毕后切断电源，待温度降至70℃以下时，可开箱取物； 五、过滤除菌装置 1. 蔡氏滤器 使用混合纤维素酯微孔滤膜，孔径有0.22微米、0.45微米等不同规格。蔡氏滤器可分为抽滤式（负压，抽真空）和加压式（正压，氮气加压）两种。 2. 针头式滤器 针头式加压塑料小滤器的上下部件为螺旋式连接，中间夹一层微孔滤膜（常用孔径为0.2