培训幻灯片：食品中大肠菌群的测定GB4789.3-2010.ppt

? 2、 初发酵试验 每个样品，选择3 个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3 管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤）, 36℃±1℃ 培养24h±2h ，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。 记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤管数。未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。  3、 复发酵试验 用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物l环，移种于煌绿乳糖胆盐( BGLB）肉汤管中，36℃±1℃ 培养48h±2h ，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 煌绿乳糖胆盐( BGLB）肉汤管 4、 大肠菌群最可能数（MPN ）的报告 ?根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表（见下页表) ，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的MPN 值。 注意：当检样的量与表中的量有增加或减少时，表内的数也应相应减少或增加。  结果报告： MPN 表 大肠杆菌0157显色培养基上的菌落 在伊红美兰乳糖琼脂（EMB）上 大肠菌群在去氧胆酸钠琼脂上的典型特征 典型菌落为红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 2-3mm 或更大。 大肠菌群在结晶紫中性红琼脂(VRBA)上典型特征 典型菌落为紫红色 , 菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为 0.5mm 或更大。 大肠杆菌在MFC琼脂上的典型特征 试验流程 1、 样品的稀释 按第一法中的稀释方法进行。 2、 平板计数 （1） 选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种两个无菌平皿，每皿1mL。同时分别取1mL生理盐水加入两个无菌平皿作空白对照。 （2） 及时将15 mL-20mL冷至46℃ 的结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ）约倾注于每个平皿中。小心旋转平皿，将培养基与样液充分混匀，待琼脂凝固后，再加3 mL-4mLVRBA 覆盖平板表层。翻转平板，置于36℃±l℃ 培养18h-24h 。 食品中大肠菌群的检验与分析 GB4789．3-2010 第一法大肠菌群MPN法 一、? 目的 1、??了解大肠菌群的定义及食品中大肠菌群测定在食品卫生检验中的意义。?? 2、练习并掌握大肠菌群的检验方法?。 二、原理 1、大肠菌群 大肠菌群系指一群在一定条件下（37℃、24小时）能够发酵乳糖、产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。根据进一步的生化鉴定试验，可将大肠菌群细分为大肠埃希氏菌（俗称大肠杆菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。 另一种说法：（主要由肠杆菌科中埃希氏菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属的一部分及沙门氏属的Ⅲ亚属细菌组成。） 3大肠杆菌的生物学特性 基本形态： 此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0 μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。 在普通营养琼脂上有3中菌落形态： 1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、 光滑、呈灰色，在生理盐水中易分散； 2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易 在生理盐水中自凝； 3）黏液型：常为含有荚膜的菌株。 培养特性： 大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44 ℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46 ℃。 三?、?材料 1、食品样品 乳、肉、禽蛋制品、饮料、糕点、发酵调味品或其他食品。 2、阳性对照菌 大肠杆菌  3、?仪器设备 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱、恒温水浴箱、 均质器、振荡器、无菌吸管或微量移液器及吸头、无菌锥形瓶、无菌培养皿、菌落计数器等。 ?4、 培养基和试剂 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤、 煌绿乳糖胆盐（BGLB ）肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA ) 、无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液、1mol/L氢氧化钠（NaOH ) 、 1mol/L 盐酸（HCL ) 。 ?四、 检验方法 第一法 大肠菌群MPN计数法。 第二法 大肠菌群平板计数法。 试验流程 第一法 大肠菌群MPN计数法 ? 1、样品的稀释 （1） 固体和半固体样品 称取25g 样品，放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000r/min-10000r/min 均质1 min-2 min ，或放入盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的