发酵工程技术第五章 种子扩大培养.ppt

3. 二级种子(种子罐) 培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%）， 32℃培养7-10个小时 培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替， 浓度为2.5% 培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基 种子的质量要求： 108-109个/ml 大小均匀，呈单个或八字排列 PH 7.0-7.2时结束，6.8→8→7.0-7.2 活力旺盛 二、青霉素生产的种子制备 制备过程 安培管 → 斜面孢子 → 大米孢子 → 一级种子 → 二级种子 → 发酵 一、斜面孢子 培养基：甘油、 葡萄糖、 蛋白胨等 培养基特点：有利于长孢子，用量少而精细 培养条件：25℃、7天, 注意湿度50%左右 二、大米孢子 培养基：大米及氮源（玉米浆） 培养基的特点：成本低、米粒之间结构疏松提高比表面积和氧的传质，营养适当（要求大米的白点小）有利于孢子的生长。 培养条件：25℃、7天，控制湿度 大米孢子的要求：1粒米含1.4*106个孢子 3、一级种子 培养基：（葡萄糖、乳糖、蔗糖）、玉米浆 目的：长菌体 培养条件：27℃，40小时 接种量：200亿孢子/吨 4、二级种子 培养基：同上 培养条件：27℃、10-14小时 接种量：10% 种子的质量要求 菌丝长稠呈丝状、菌丝团很少，有中小空孢，处于Ⅲ—Ⅳ期 青霉素发酵菌丝体的生长共分为6个期，1-4为年青期，4-6期合成青霉素的能力最强 思考：固体培养和液体培养的优缺点？ 思考：固体培养和液体培养的优缺点？ 优点 （1）酶活力高。（因为菌丝体密度大） （2）生产过程中无菌程度要求不是很严格。 （3）对于固体培养，通常用于固体发酵，由于产物浓度大，易于分离，可以有效的降低产品分离成本。 缺点： （1）生产劳动强度较大，占地面积大，不宜自动化生产。 （2）周期长。 （3）培养过程中环境条件控制较难。 固体培养 思考：固体培养和液体培养的优缺点？ 优点 （1）生产效率高，便于自动化管理。 （2）生产过程中温度、溶氧、pH值等参数可以实现全面控制。 （3）通常生产液体种子，整个生产周期较短。 缺点： （1）无菌程度要求高，相对生产设备投资较大。 （2）对于某些种类的发酵，液体培养因投资大、生产密度大而难以实现。 　 液体培养 End Thanks! * 发酵的一般流程 种子扩大培养 培养基配制 空气除菌 培养基灭菌 发酵生产 下游处理 发酵设备 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过三角瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 第一节 种子扩大培养的目的与任务 一、种子扩大培养的概念: 种子扩培的目的 菌种扩大培养的目的就是要为每次发酵罐的投料提供相当数量的代谢旺盛的种子。 种子的要求： 不但要得到纯而壮的培养物，还要获得活力旺盛的、 接种数量足够的培养物。 第二节 种子培养的方法 固体培养又分为浅盘固体培养和深层固体培养，统称曲法培养。它起源于我国酿造生产特有的传统制曲技术。其最大特点是固体曲的酶活力高。 1、固体培养 培养基原料：小麦麸皮、大米、小米 过程：上述原料和水混合→灭菌→冷却→接种 固体培养具有以下优点： ①原料廉价：以谷物和农业废物为主要原料，只需外加适量水分、无机盐等。培养基组成简单。 ②防止污染：利用霉菌能在水分较低的基质表面进行增殖的特性，在这种条件下，细菌生长不好，因此不易引起细菌污染。 ③通气：在固体培养中，氧气是由基质粒子间空隙的空气直接供给微生物，比液体培养时的用通气搅拌供给氧气节能。 ④酶活力高。（因为菌丝体密度大） ⑤对于固体培养，通常用于固体发酵，由于产物浓度大，易于分离，可以有效的降低产品分离成本。 缺点： （1）生产劳动强度较大，占地面积大，不宜自动化生产。 （2）容易污染其他霉菌。 （2）周期长。 （3）培养过程中环境条件控制较难。 2、液体培养 培养基配制成液体，接种培养。 两类：静止培养和通气培养。静止培养适于厌氧培养；通气培养适于需氧培养。 通气培养，实验室阶段利用摇瓶培养。 特点是容易按照生产菌种对于代谢的营养要求以及不同生理时期的通气、搅拌、温度、与培养基中氢离子浓度等条件，选择最佳培养条件。 优点 （1）生产效率高，便于自动化管理。 （2）生产过程中温度、溶氧、pH值等参数可以实现全面控制。 （3）通常生产液体种子，整个生产周期较短。 缺点： （1）无菌程度要求高，相对生产设备投资较大。 （2）对于某些种类的发酵，液体培养因投资大、生产密度大而难以实现。 　 第三节 种子扩大培养工艺 实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇