补肾中药生精方对肾阳虚男性不育患者精子dna印记基因h19表达的研究-中医妇科学专业论文.docxVIP

补肾中药生精方对男性不育患者精子 补肾中药生精方对男性不育患者精子 DNA 印迹基因 H19 表达的研究 山东中医药大学 山东中医药大学 2012 年硕士学位论文 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 引 言 据统计，中国目前约有 4000 多万不孕不育症患者，而且这个数字每年都在迅速 的增加。造成不孕不育的原因有很多，其中约 20%的原因来自于男性。流行病学上， 夫妇同居一年，有正常的性生活，未采取避孕措施而尚未使女方受孕者为不育。 在中国传统医学上，春秋战国时期就有了对男性不育的认识。“不育”最早见于 《周易》。《内经》对男性不育进行了系统的论述，提出了以肾为核心的男性学理论。 传统中医学认为，肾藏精，主生殖，补肾法经过历代医家总结而被认为是最基本的治 法，即使在男性不育的其他治疗方法中也往往兼夹运用补肾之法。然而补肾法治疗男 性不育以及补肾中药对精子的作用机制、靶点的研究尚没有统一的定论，缺乏系统的 论述。 基因组印迹即遗传印迹，或称亲本印迹，是指通过单亲传递某些遗传学性状的现 象。某些基因呈现亲源依赖性的单等位基因表达，而另一等位基因不表达或表达极弱。 基因组印迹是一种特殊的表观遗传学修饰，这种遗传学的修饰不改变 DNA 序列，其作 用的位点在基因表达调控的水平上，此种改变可以通过性细胞的成熟分裂或者体细胞 的有丝分裂而遗传给后代。DNA 差异性甲基化、染色质组蛋白的修饰等表观遗传修饰 可能是印记基因产生的相关机制。差异甲基化是指不同亲本来源的两个等位基因不同 程度的甲基化表达，目前认为是其中最可能的机制[1]。印迹基因具有性别特异性、组 织特异性，能在配子形成过程中擦除和重建并可以在体细胞的有丝分裂过程稳定地传 递给子代细胞。基因印迹现象保证了基因的正常表达。如果某些异常因素的存在致使 导致这些基因无法正常表达，出现双等位基因表达或者不表达，机体就会出现一系列 的异常表现。 人 H 19 印迹基因定位于 11p15.5,不具备表达蛋白质的功能, 只在 mRNA 水平上 发挥作用, 调控其他基因的表达, 在人体某些重要的生理过程中占据重要的作用。如 果 H 19 印迹基因表达异常可导致某些遗传疾病或肿瘤疾病的发生。由于其在生殖领 域的重要作用，近年来也越来越多的受到人们的重视。有研究发现，运用亚硫酸氢钠 基因测序技术对 H19 印迹基的表达状态进行检测, 发现在胎儿的精原细胞中 H19 甲基 化印迹是删失的, 而在成人精子发生的不同阶段却一直存在。这种特异性的 H19 差异 性甲基化印迹是建立在增殖期精原细胞进入减数分裂之前[2]。 本试验研究通过补肾中药提高精子质量，进而提高配偶临床妊娠率。研究补肾中 药对精子 DNA 印迹基因 H19 的作用及可能的靶点，以及精子 DNA 印迹基因 H19 与其 他精子质量参数的相互关系，证明补肾治疗男性不育的有效性，进一步论述“肾藏精， 主生殖”的观点，为进一步的临床实验研究做准备。 临床研究 肾阳虚不育患者 67 例 随机双盲分组 治疗组 34 例 对照组 33 例 进行精液分析、中医证候评分以及 H19 印迹基因的检测 进行精液分析、中医证候评分以及 H19 印迹基因的检测 两组分别用药三个月 药后统计分析 精液密度、a 级精子活力、a+b 级 精子活力、正常形态率、 证候评分 H19 印迹基因表达 自然同房 同房后跟踪随访 妊娠 统计临床妊娠率 技术路线图 1 对象与方法 1.1 研究对象 病例来源 所有男性不育病例均来自山东中医药大学附属医院中西医结合生殖与遗传中心 门诊，时间界限为 2011年7 月至 2012年1 月。根据试验设计要求选取肾阳虚患者做 跟踪治疗及观察。 一般资料 由实验标准，初次筛选 67 例合格病例：精液常规分析诊断为严重少和（弱）精 子症，每周同房次数为 2-3 次。将 67 例患者，按随机数字表法分为 2 组，中药生精 方组 34 例，五子衍宗丸方对照组 33 例。 诊断标准 （1）中医诊断标准:参照《中药新药临床研究指导原则》相关标准拟[3]，肾虚型 男性不育主症:不育，性欲淡漠，精液稀少，精子活动力低下；次症:腰膝酸软或腰膝 酸痛，大便溏薄、夜尿频多或余淋不尽，舌淡苔薄白，脉沉细弱。以上主症“不育” 必须具备，兼具其余各项中 1 项和次症中的 2 项，即可诊断。（2）西医诊断标准:按 照 WHO 标准，性功能正常、未采取避孕措施一年以上而不能使女方怀孕者，即可诊断 男性不育症；弱精子症诊断标准[4]:在射精后 60 分钟内，a 级精子活力低于 25%或(a+b) 级精子活力低于 50% (a 级:快速前向运动；b 级:慢速或呆滞的前向运动；c 级:非前 向运动；d 级:不动)；少精子症:精子密度低于 20