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多粘芽孢杆菌发酵放大工艺的研究 　　摘要：研究多粘芽孢杆菌的发酵放大工艺，探索在5t发酵罐中采用不同溶氧、不同碳源A浓度及不同种类的碳源对发酵的影响。结果表明，混用碳源B和碳源C可以较好的阻止多粘芽孢杆菌自溶，大部分菌体形成芽孢，发酵液中的芽孢数量为5亿/mL，这些研究为后面的工业化生产打下了良好的基础。 　　关键词：多粘芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）；放大；自溶 　　中图分类号：Q813.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）11-2634-02 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.11.019 　　Scale-up Fermentation of Paenibacillus polymyxa 　　ZHOU Rong-hua1，CUI Yi-ning2，RAO Ben1，LIAO Xian-qing1，YANG Zi-wen1 　　（1.National Biopesticide Engineering Research Center， Hubei Academy of Agricultural， Wuhan 430064， China； 　　2.Wuhan High School， Wuhan 430061， China） 　　Abstract： We studied the scale-up fermentation of Paenibacillus polymyxa. Different dissolved oxygen， different concentration of carbon source A and different types of carbon sources on the impact of fermentation were studied at 5 tons fermenter. The results showed that the carbon B combined with carbon C can well prevent autolysis of Paenibacillus polymyxa and most bacteria can form spores. The number of spores in the fermentation broth was 500 million/mL. All these lay a good foundation for the industrialization. 　　Key words： Paenibacillus polymyxa； scale-up； autolysis 　　多粘类芽孢杆菌（Paenibacillus polymyxa）是芽孢杆菌科（Bacillaceae）类芽孢杆菌属（Paenibacillus）的革兰氏阳性细菌。多粘类芽孢杆菌细胞呈杆状，大小为（0.5～2.5） μm×（1.2～10.0） μm，G+C含量为40%～50%；利用周生鞭毛运动，在膨大孢子囊中产生椭圆型芽孢；最适生长pH为7，最适温度为28 ℃～30 ℃；兼性厌氧，能分解葡萄糖和其他糖类产酸，有时产气，在营养琼脂上无可溶性色素，应用前景广阔[1]。 　　多粘类芽孢杆菌能分泌大量的活性物质，对许多细菌和真菌有抑制活性，能提高植物的抗病能力，促进植物生长，提高产量，并能产生多肽类抗菌物质对植物病原真菌有较好的拮抗活性，是一种较好的生防细菌。另外，多粘芽孢杆菌还具有多种酶活、抗氧化及抗肿瘤等生物活性。随着多粘类芽孢杆菌研究的深入，它在工农业领域、医药领域、生物学理论研究方面将有更广阔的应用前景[2，3]。尽管多粘芽孢杆菌有着良好的应用前景，但是目前大部分研究主要停留在实验室阶段，市场上的产品并不多见，仅仅有的几个产品芽孢数量也不高，这主要是因为该菌的发酵放大至生产规模后过程较难控制，发酵水平不稳定，并且常常在发酵末期菌体大量自溶，而不是形成芽孢，这成为了阻碍多粘芽孢杆菌产业化的重要因素。 　　为了解决上述问题，本研究以分离得到的多粘芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa NR1为研究对象，研究不同的发酵放大策略，完成了多粘芽孢杆菌在5 t发酵罐中的发酵放大研究，发酵液芽孢数为5亿/mL，在国内市场中处于较为领先地位。 　　1 材料与方法 　　1.1 菌株 　　多粘芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa NR1为自行筛选得到。 　　1.2 培养基 　　1.2.1 种子培养基 在1 000 mL去离子水中加入质量体积比为2.0%葡萄糖、2.0%蛋白胨、2.0%酵母浸粉，121 ℃灭菌15 min。