茶多酚-葡萄柚提取物混合液抗变异链球菌机制的体外研究-口腔临床医学专业论文.docxVIP

福建医科大学硕士研究生学位论文茶多酚- 福建医科大学硕士研究生学位论文 茶多酚- 葡萄柚提取物混合液抗变异链球菌机制的体外研究 PAGE PAGE 2 茶多酚-葡萄柚提取物混合液抗变异链球菌机制的体外研究 研究生：卢国英 导 师：黄晓晶 副教授 中文摘要 目的： 茶多酚，葡萄柚提取物（Grapefruit-seed Extract,GSE）是近来研究较多的天 然提取物，且作为天然防龋物质也备受关注。然而，两者在单组分使用时存在着 各自的不足：为达到有效抑菌浓度的茶多酚溶液具有一定的苦涩感；前期临床研 究发现 GSE 单独使用的抑菌效果仅与西吡氯铵相当，不如口泰漱口液。本研究 拟探讨这两种天然物质配伍应用于防龋的可行性，即希望通过两物质的配伍应用 达到降低单组分的使用剂量和副作用。龋病是细菌感染性疾病，变异链球菌 （Streptococcus mutans,S.mutans）是口腔中公认的主要致龋菌之一，其致龋力与 S.mutans 的产酸、耐酸、黏附以及产胞外多糖的能力密切相关。因此，本文通过 体外实验研究茶多酚-GSE 混合液对 S.mutans 致龋力的影响，探讨两者配伍的最 佳浓度及可能的防龋机制，为茶多酚-GSE 混合液的临床应用提供实验依据。 方法： 1．茶多酚-GSE 混合液对 S.mutans 生长、产酸的影响 通过液体稀释法测定单组分茶多酚、GSE 的最低抑制浓度（Minimal Inhibitory Concentration,MIC）值，并采用棋盘稀释法测定茶多酚-GSE 混合液对 S.mutans 的 MIC 值，通过计算分级抑制浓度（Fractional Inhibitory Concentration, FIC）指 数来判定两者的联合效应；测定低于 MIC 值浓度的茶多酚-GSE 混合液对 S.mutans 的△pH 值，得出混合液对 S.mutans 产酸的影响。 2．茶多酚-GSE 混合液对 S.mutans 黏附能力的影响 使用低于混合液 MIC 值 4 个浓度（即 1/2、1/4、1/8、1/16 MIC）的混合液 与 S.mutans 共同培养，计算 S.mutans 黏附率和黏附抑制率；并在扫描电镜下观 察 1/2 MIC 混合液和空白组分别处理 S.mutans 后对玻片黏附的形态学特征。 3 ．茶多酚 -GSE 混合液对 S.mutans 产胞外多糖和葡糖基转移酶 （Glucosyltransferase,GTF）的影响 使用低于混合液 MIC 值 4 个浓度（即 1/2、1/4、1/8、1/16 MIC）的混合液 与 S.mutans 共同培养，收集上清液，分为 2 份。一份提取 GTF，采用考马斯亮 蓝法和 Somogyi 法分别测定总蛋白和还原糖含量，计算酶活力和比活力大小；另 一份上清液采用蒽酮法测定胞外多糖含量。 结果： 1．抑菌、产酸实验 茶多酚和 GSE 单独使用时，其 MIC 分别为 2mg/ml 和 46.88mg/L，联用时可 降低单组分的使用浓度，如茶多酚 1mg/ml 联用 GSE 37.5mg/L 即可达到联合应 用的 MIC，FIC=0.75；S.mutans 培养前后的△pH 值随混合液浓度的增加而明显 降低，实验组各浓度组与对照组相比均有统计学差异（P0.05）。 2．黏附实验 随着茶多酚-GSE 混合液浓度的增加，混合液对 S.mutans 黏附率随浓度升高 而下降，黏附抑制率逐渐升高，黏附抑制率的变化与混合液浓度之间呈剂量依赖 正相关性；经统计学分析，实验组各浓度组与对照组相比均有统计学差异 （P0.05）。实验组各浓度组间也存在统计学差异（P0.05）。扫描电镜图片显示： 空白组与实验组相比细菌之间含有较明显的不定形团块状物质积聚。 3．胞外多糖和 GTF 实验 随着茶多酚 -GSE 混合液浓度的升高， S.mutans 产水不溶性葡聚糖 （Water-insoluble Glucann,WIG）、水溶性葡聚糖含量逐渐降低：与空白组对照， 实验组只有最高浓度组产水溶性葡聚糖量有统计学差异（P0.05），各实验组产 WIG 与对照组相比均有统计学差异（P0.05）。随着茶多酚-GSE 混合液浓度的 升高，S.mutans 的 GTF 活力及比活力逐渐降低，各实验组与对照组之间均有统 计学差异（P0.05）。 结论： 1．茶多酚-GSE 混合液对 S.mutans 的体外抗菌活性具有相加作用，较各自的 单组分在更低浓度即可有效抑制 S.mutans 生长；各浓度组均能抑制 S.mutans 产 酸。 2．茶多酚-GSE 混合液可有效抑制 S.mutans 对玻片的黏附能力，扫描电镜结 果推断其能通过抑制 S.mutans WIG 的合