超声联合微泡造影剂介导基因转染的体内外实验研究-影像医学与核医学专业论文.docxVIP

华 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 1 PAGE 1 超声联合微泡造影剂介导基因转染的体内外实验研究 华中科技大学同济医学院附属同济医院超声影像科 硕士学位申请者：胡良军 指 导 教 师：李开艳 副教授 摘 要 第一部分 不同超声辐照时间和微泡剂量介导HepG2细胞基因 转染的实验研究 目的 探讨不同超声辐照时间和微泡剂量与基因转染效率之间的关系，初步摸索 适宜转染的参数条件。 方法 报告基因用增强型绿色荧光蛋白质粒（pEGFP），以人肝癌细胞（HepG2） 为研究对象。超声频率 1MHz，声强 0.5W/cm2，对加入 pEGFP 和不同剂量微泡造影 剂（MB）的 HepG2 细胞辐照不同时间。24h 后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达 情况，流式细胞仪检测基因转染效率，台盼兰染色检测细胞存活率。 结果 各试验组均可见不同程度荧光蛋白表达，辐照时间为 20s 和微泡剂量为 60μl 时可达到较理想的转染效率。 结论 在超声频率和声强一定条件下，不同超声辐照时间和微泡造影剂剂量有不 同的基因转染效率，20s、60μl 是一个较理想的参数，为基因治疗进一步研究提供了 参考。 关键词 超声检查；微气泡；转染；细胞系, 肿瘤 第二部分 共聚物Pluronic P85增强微泡造影剂介导基因转染的 体内初步实验研究 目的 初步探讨静脉注射共聚物 Pluronic P85 和黏附质粒的微泡造影剂（MB）， 同时经体表给予一定强度的超声辐照，能否增强辐照部位局部组织的基因转染与表 达。 方法 质粒 DNA 用绿色荧光蛋白质粒（pEGFP）。建立裸鼠肝癌皮下移植瘤模 型。含有 pEGFP 转染液经尾静脉注入。实验分为 3 组，第一组：pEGFP +超声辐照（US）； 第二组：pEGFP+MB+超声辐照（US）；第三组：pEGFP+MB+P85+超声辐照（US）。 脉冲多普勒超声辐照(1MHz，0.5W/cm2)瘤组织，持续时间 2min，7d 后用活体荧光成 像分析系统分析，然后取肿瘤组织快速冰冻切片，荧光显微镜计数 EGFP 阳性的细胞， HE 染色评价其组织损伤情况。 结果 第二组和第三组有较多的绿色荧光蛋白的表达，第一组绿色荧光蛋白表达 较少，第三组表达量高于第一、二组，差异具有统计学意义（P0.05），第二组表达 量高于第一组，差异具有统计学意义（P0.05）。HE染色肿瘤组织无坏死灶出现。 结论 初步得知共聚物 Pluronic P85 可增强超声辐照微泡造影剂介导基因转染与 表达，可能具有一定的协同作用，且对组织无损害，值得进一步关注和研究。 关键词 超声波；微泡造影剂；共聚物；基因转染；肝癌 Ultrasound and Microbubble：Their Function in Gene Transfection in Vitro and in Vivo Dept.of Ultrasound,Tongji Hospital,Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology,Wuhan City 430030 Candidate: Hu Liangjun Tutor: Prof. Li Kaiyan Abstract Part 1 Ultrasonic Exposure-time and Microbubble-dosage: Their Effect on Gene Transfection in HepG2 Cells in Vitro Objective To investigate the relationship of gene transfection efficiency with different ultrasound exposure time and dose of microbubble（MB） mediated gene transfection，and to find the appropriate ultrasound parameters for gene transfection． Methods Plasmid encoding enhanced green fluorescent protein（pEGFP）was chosen as the report gene and HepG2 cells was chosen as the research object. The HepG2 cells plus pEGFP and different dose of microbubble were exposed to ultrasound (1MHz, 0.5W/cm2