茶多酚联合表柔比星对人膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响及机制-外科学(泌尿外科)专业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 T24 bladder cancer cell line T24 膀胱癌 T24 细胞 BC bladder cancer 膀胱癌 TP tea polyphenols 茶多酚 EPI epirubicin 表柔比星 CQ chloroquine 氯喹 TEM transmission electron microscope 透射电子显微镜 LC3-II microtubule-associated protein 1 light chain 3-II 微管相关蛋白 1 轻链 3-Ⅱ P62 sequestosome 1 P62 蛋白 CASP3 caspase3 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3 PARP poly ADP-ribose polymerase 聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶 PBS phosphate buffered saline 磷酸盐缓冲液 PVDF polyvinylidene fluoride 聚偏二氟乙烯膜 SDS Sodium dodecyl sulfate Polyacrylami-de gelelectrophoresis 十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺 凝胶电泳 BCA Bicinchoninic acid 蛋白浓度测定试剂盒 ATG autophagy associated gene 自噬相关基因 GFP Green fluorescent protein 绿色荧光蛋白 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 1 茶多酚联合表柔比星对人膀胱癌 T24 细胞增殖和凋亡 的影响及机制 摘 要 目的 据美国癌症学会《2015 年癌症统计》称，2015 年膀胱癌新增病 人约 56320，继续居男性新发肿瘤第 4 位，死亡病例约 11510 例。在所 有这些病例中约 70％以上为浅表性膀胱癌。目前对浅表性膀胱癌最主 要的治疗手段是经尿道膀胱肿瘤切除加术后灌注化疗，但术后易复发， 术后灌注化疗是影响膀胱癌复发的一个重要因素。如何提高化疗效果 是目前临床亟待解决的科学问题。表柔比星（epirubicin，EPI)是膀胱 癌的常用灌注化疗药物，茶多酚（polyphenols，TP)是一个重要的化疗 增敏剂，本研究通过体外细胞实验，研究 TP 增强 EPI 诱导膀胱癌 T24 细胞凋亡的机制，为茶多酚联合表柔比星治疗膀胱癌的临床应用提供 理论和实验依据。 方法 取不同浓度 TP 和 EPI 分别作用膀胱癌 T24 细胞 24 h，经 MTT 试验初筛，选择药物作用浓度 TP（88.8 μmol/L）和 EPI（4.6 μmol/L）。 试验分空白对照组、TP 组（88.8 μmol/L）、EPI 组（4.6 μmol/L）、联合 组（TP 88.8 μmol/L +EPI 4.6 μmol/L）共 4 组分别处理对数生长期 T24 细胞 24 h，用 Annexin V-PI 双流式细胞术检测各组细胞的凋亡率；处 理 T24 细胞 8 h 后，在透射电镜观察各组细胞胞质内自噬体的生成及变 2 化；处理稳定表达 GFP-LC3 的 T24 细胞 8 h 后，在荧光显微镜下观察 绿色荧光蛋白 LC3 荧光斑的形成与变化；处理 T24 细胞不同时间，用 Western blot 技术检测自噬相关蛋白 LC3-Ⅱ（8 h）、P62（8 h），凋亡相 关蛋白 CASP3（16 h）、 PARP（16 h）表达变化； 结果 TP（88.8 μmol/L）、EPI（4.6 μmol/L）联合处理组较单药组引起 的细胞增殖抑制率 (F=730.411, P=0.000) 和细胞凋亡率（ F=161.945, P=0.000）显著提高。EPI（4.6 μmol/L）单药处理 T24 细胞可以诱导自