茶树miRNA的分离鉴定及其与茶尺蠖取食诱导的差异表达特征研究-茶学专业论文.docxVIP

独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同 志对本研究所做的任何贡献均己在论文中 作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名:洋地体 时间: )D I 年 4 月 J 日 关于论文使用授权的说明 J.. 本人完全了解安徽农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留 送交论文的复 印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意安撒农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容 。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名:均咐称 时间: 二l-ol?;. 年i月 1 日 导师签名: 时间: )01 7 年 4月 1 日 I I 摘 要 miRNA 是一类內源非编码的长度为 20-25 nt 的单链小分子 RNA，其在植物体内 主要通过剪切 mRNA 对基因进行转录后调控，进而对植物生长发育和响应各种逆境 胁迫过程中发挥着重要作用，因而有关 miRNA 的调控作用正成为关注热点。然而 miRNA 在植物对害虫取食诱导防御机制中的调控研究甚少，同时也很少有茶树中的 miRNA 序列被报道。因此本论文借助小 RNA 深度测序、miRNA 芯片和 qRT-PCR 等 技术，并结合生物信息学分析手段，对茶树 miRNA 进行分离鉴定，在此基础上获得 茶树被茶尺蠖取食诱导相关的差异 miRNA，以进一步明确茶树 miRNA 特征及其被 茶尺蠖取食诱导的差异 miRNA 种类与功能。 论文获得的主要结果如下： （1）对茶树叶片的小 RNA 进行 Solexa 高通量测序，共获得有效序列 8,796,700 条， 占总读数的比例高达 81.30%，对其进行 miRNA 序列分析发现，高拷贝读数（100 次）的 miRNA 占总读数的 27%。对不同拷贝数 miRNA 序列进行 qRT-PCR 验证发现， 其结果与与测序的拷贝数一致。 （2）在所获得的茶树 miRNA 中，其中的 253 条属于保守 miRNA 序列分别隶属于 30 个保守 miRNA 家族，574 条茶树特异的 miRNA 序列；茶树保守家族中的 16 个家族 （miR156， miR166， miR535， miR6149 等）成员数量明显高于拟南芥等其他植 物物种；生物信息学分析表明，很多茶树 miRNA 调控的靶基因与生长发育、次生代 谢、逆境响应及信号转导等功能相关。 （3）对测序获得的 miRNA 经过芯片鉴定后得出可靠的茶树 miRNA169 条，其中保 守 miRNA 为 130 条，茶树特有 miRNA 为 39 条。进一步分析发现，有 35 条 miRNA 在叶部的表达量明显高于根部，有 60 条则呈相反规律。 （4）基于 miRNA 芯片筛选发现，茶树被茶尺蠖取食后，差异表达的 miRNA 共有 29 条，其中下调表达的 27 条，上调表达的 2 条。在差异表达的 miRNA 中，miR159， miR319，miR396 作用的靶基因具有调控防御反应、GA、ABA 等激素合成与代谢相 关等功能。 （5）从茶尺蠖取食诱导差异表达明显的 miRNA 中，随机选择 7 条进行 qRT-PCR 验 证，结果发现，茶树分别被茶尺蠖取食和茶尺蠖口腔分泌液处理后，它们的表达量均 明显比各自的对照降低；而喷施 MeJA 处理后，发现其中的 5 条 miRNA 表达量也明 显低于对照。 关键字：茶树，miRNA，茶尺蠖，高通量测序，miRNA 芯片，诱导防御 I II Abstract MicroRNAs are a class of endogenous,non-coding single-stranded small RNAs that regulate numerous genes by guiding target mRNA cleavage in plant, and miRNAs play an important role in various aspects of plant growth and development process and environment stress responses. So it is becoming concerned focus about the regulation role of miRNA.. However, little attetion has been focused on th