茶树谷氨酰胺合成酶和茶氨酸合成酶基因原核表达、抗体制备及其表达差异的分析-食品科学专业论文.docxVIP

I IV 中英文缩写与注释 术语与缩略语 英文全称 中文名称 Acr Acrylamide 丙烯酰胺 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 APS Ammonium persulfate 过硫酸铵 Bis N. N-methylene-bisacylamide N, N-亚甲双丙烯酰胺 BSA Bovine serum albumin 牛血清蛋白 DTT DL-Dithiothreitol 二硫苏糖醇 HPLC High performance liquid chromatography 高效液相色谱 HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 IPTG Isopropyl. D. thiogalatopyranoside 异丙基-β-D 硫代半乳糖苷 KDa kilodaIton 千道尔顿 NADPH Triphosphopyridine nucleotide 还原型辅酶Ⅱ NP-40 NonylPHenoxypoly(ethyleneoxy)ethanol 壬基酚聚氧乙烯醚 OD Optical density 光密度 PCR Polymetase chain reaction 聚合酶链式反应 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 PVDF Polyvinylidene Fluoride 聚偏二氟乙烯 PVPP Polyvinylpolypyrrolidone 聚乙烯吡咯烷酮 RNA Ribonucleic acid 脱氧核糖核酸 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 SDS SDS-polyacrylamide gel electrophoresis SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 TCA: Trichloroacetic acid 三氯乙酸 TEMED Tetramethylethylenediamine N, N, N’, N’-四甲基乙二胺 Tris Trishydroxymethylamino-methane 三(羟甲基)氨基甲烷 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导 F进行的研究正作及取得的研究成 果。尽挠所知，除了文中特别加以标址:军 n致谢的地厅外，论文中不包含其他人己经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得安徽农业大学或其它教育机构的学位或证书 部使m过的材料 e 与我一!可工作的同志对本研究历做的任何交献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢窟。 研究牛签名: 王 明 时间: lvjl 年 μl如 关子论文使用授权的说明 本人完全了解安微农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被资阅和借阅，可以采用影印、缩印豆豆扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意安徽农业大学可以用不同方式在不同媒体仁发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名: 1-塑一 时间: (I 年{ I阳 第一导师签名: 三三三一 时间: hf( 年 j 月(f-日 PAGE PAGE 1 1 文献综述 茶树(Camellia sinensis)是多年生常绿叶植物，富含茶多酚、咖啡碱等重 要的次生代谢产物。 氨基酸是茶叶中的重要品质成分之一，其组成、含量与茶 叶的滋味、香气等关系密切，直接影响茶叶品质。目前已在茶叶中发现了26种氨 基酸[1]，其中茶氨酸( N-乙基-γ-氨基-L-谷氨酰胺)是茶叶中含量最高的一种游离氨 基酸，占游离氨基酸总量的50％以上 [2]。茶氨酸是1950年在玉露茶的新梢中被 发现，目前仅在蕈 (Xerocomus badius) 和山茶属 (Camellia japonica and Camellia sasanqua)的少数植物中有发现 [1]。茶氨酸是茶叶中最重要的滋味成分，能降低 茶叶的苦涩味，对茶叶所呈的鲜爽味有重要作用，对人体具有许多重要的生理 保健功能，如降压、抗癌、抗过敏、保护神经细胞、增强记忆力和镇静安神等[2-4]。 已有文献报道通过同位素示踪的方法研究茶氨酸代谢过程中关键酶的作用[5-7]， 但从蛋白水平研究茶树体内茶氨酸的生物合成还鲜见报道。本文在前人的研究基 础上，利用免疫印迹杂交技术，从蛋白质水平上直接分析了茶树中茶氨酸合成酶 和谷氨酰胺合成酶的表达情况。 1.1 免疫印迹杂交及其研究方法 原核表达 原核表达是分子生物学领域的一项重要技术，通过构建表达载体，将外源目 的基因导入表达菌株，使其在特定的原核生物或细胞内进行表达[8]。一个完整的 表达系统通常包括配套的表达载体和表达菌株，选择表达系统通常要根据 实验目的，比如表达量