肠源性脓毒症腹腔渗液致急性肺损伤的机理研究-外科学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 2 肠源性脓毒症腹腔渗液致急性肺损伤的机理研究 中文摘要 目的：通过观察肠源性脓毒症腹腔渗液门、腔静脉注射所致肺损伤情况，探索肠源 性脓毒症腹腔渗液导致急性肺损伤的机理。 方法：采用清洁级健康成年 SD 大鼠 108 只，随机提取 12 只作为模型组（腹腔渗液 组），采用盲肠结扎并穿孔法(CLP)，制备肠源性脓毒症腹腔渗液（EFIS）模型，采集 腹腔渗液，以精密过滤输液器（过滤介质孔径 5μm）过滤去除直径大于 5μm 的颗粒 状物，滤出液备用；其余 96 只大鼠随机分为渗液组（E 组，n=48）和对照组（S 组， n=48）；每组再随机分为门静脉亚组（PV 组、n=24）、腔静脉亚组（VC 组、n=24）， 各亚组按 1h，2h，4h，6h 时间点再分为 4 个次亚组，每个次亚组 6 只大鼠，共 16 个次亚组。E 组分别经门、腔静脉注射处理后的腹腔渗液（1ml/只），S 组注射等量的 无菌生理盐水；各组大鼠分别于注射后第 1h，2h，4h，6h 时间点经腹主动脉采血、 处死后取材肺标本、收集肺泡灌洗液（BALF）；观察肺的形态学改变；测定肺湿/干 比值(W/D)；肺组织经固定、切片、染色处理后，光镜下阅片、病理学评分；酶联免 疫吸附试验法（ELISA）测定腹腔渗液、血清及 BALF 中 TNF-α及 IL-6 含量。MB-80 微生物快速动态检测系统测定腹腔渗液、血清及 BALF 中 LPS 含量；所有数据采用 SPSS17.0 for Windows 统计软件进行处理，P＜0.05 为差异有统计学意义，P＜0.01 为 具有显著差异。 结果： 1) 每只大鼠可采集 5-10ml 腹腔渗液，其性状为淡黄色或淡粉色略混浊样液体。细 菌涂片镜检见革兰氏阴性杆菌，细菌培养分离出 8 株细菌，其中大肠杆菌菌落数 最多；腹腔渗液中亦检测出一定水平的 LPS、TNF-α及 IL-6。 2) 两组对照组（PV-S、VC-S 组）各观察时间点的肺形态学及光镜所见、病理学评 分、肺湿/干重比值(W/D)、血清及 BALF 中 LPS、TNF-α及 IL-6 水平均无明显差 异，均无统计学意义（P＞0.05）。渗液组（PV-E、VC-E 组）与对照组（PV-S、 VC-S 组）相比较：各观察时间点肺形态学及光镜所见差异显著，肺组织病理学 评分、肺湿/干重比值(W/D)、血清及 BALF 中 LPS、TNF-α及 IL-6 测定值均较对 照组（PV-S、VC-S 组）明显增高，差异具有显著统计学意义（aP＜0.01，bP＜0.01）。 3) 肺脏大体形态学及光镜所见：门静脉组（PV-E）各时间点肺脏大体观：肺的水肿、 出血程度均较腔静脉组（VC-E）明显；镜下所见：肺泡壁、肺间质水肿程度，肺 泡腔中性粒细胞及单核细胞浸润程度，肺泡间质、肺泡腔充血出血程度均较腔静 脉组（VC-E）明显； 4) 病理学评分：PV-E 组各时间点肺组织病理学评分均较 VC-E 组高，PV-E 组 1h 即 出现明显肺损伤，出现时间较 VC-E 组早，且随时间呈递进式加重，PV-E 组与 VC-E 组病理学评分相比较，差异具有统计学意义（aP＜0.05）。 5) 肺湿/干重比值(W/D)测定：PV-E 组与 VC-E 组各观察时间点的肺湿/干重比值(W/D) 相比较，差异均具有统计学意义（aP＜0.05）； 6) 血清及 BALF 中 LPS 水平：PV-E 组与 VC-E 组各时间点 LPS 水平均呈逐渐下降 趋势，但 PV-E 组下降更明显；与 VC-E 组相比较，1h、2h、4h 时间点 LPS 水平 差异明显，均具有统计学意义（bP＜0.05），两组间 6h 时间点 LPS 水平无明显差 异（P＞0.05）。 7) 血清及 BALF 中 TNF-α及 IL-6 水平：PV-E 组与 VC-E 组血清及 BALF 中 TNF-α 及 IL-6 水平的测定水平在各观察时间点均逐渐增高，TNF-α水平 4h 达峰值，达 峰值后 6h 有下降趋势；IL-6 水平 6h 达最高值。PV-E 组与 VC-E 组相比较，各时 间点 TNF-α及 IL-6 水平差异均具有统计学意义（aP＜0.05）。 结论： ⑴. 利用 CLP 方法可成功制备肠源性脓毒症模型，腹腔渗液经门静脉及腔静脉注射均 可造成大鼠急性肺损伤； ⑵. 肠源性脓毒症腹腔渗液中存在大肠杆菌为主的多种致病菌、LPS、TNF-α及 IL-6 等主要成分； ⑶. 门静脉组血清及肺泡灌洗液中 LPS 水平低于腔静脉组， TNF-α及 IL-6 水平明显 高于腔静脉组，而肺损伤程度比腔静脉组明显严重，LPS 水平及 TNF-α、IL-6 水 平与肺损伤严重程度具有一定的相关性，提示 LPS