肠道病毒71型手足口病ELISA检测体系的建立-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所 取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文的研究成果不包 含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的作品的内容。对本论文所 涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本 学位论文原创性声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者签名： 李唤新 2015 年 5 月 20 日 非公开学位论文标注说明 (本页表中填写内容须打印) 根据南开大学有关规定，非公开学位论文须经指导教师同意、作者本人申 请和相关部门批准方能标注。未经批准的均为公开学位论文，公开学位论文本 说明为空白。 论文题目 申请密级 □限制(≤2 年) □秘密(≤10 年) □机密(≤20 年) 保密期限 20 年 月 日至 20 年 月 日 审批表编号 批准日期 20 年 月 日 南开大学学位评定委员会办公室盖章(有效) 注：限制★2 年(可少于 2 年);秘密★10 年(可少于 10 年);机密★20 年(可少于 20 年) 摘要 摘要 摘 要 手足口病（Hand-foot-mouth disease）是由多种肠道病毒引起的传染性疾病， 患者主要是 5 岁以下的儿童。虽然手足口病的临床症状表现为轻微的发疹及发 烧症状，但是 EV71 病毒的感染能够引发严重的神经疾病，如致死性脑炎，无 菌性脑膜炎，急性松弛性麻痹，而 CA16 病毒的感染一般不会导致这些疾病。 EV71 病毒于 1969 年在美国的一个 9 个月大患有致死性脑炎的婴儿体中首 次分离得到，它隶属于小 RNA 病毒科肠道 A 种病毒。目前由于没有合适的疫 苗和抗病毒药物，因此，对感染 EV71 型病毒的早期诊断和鉴别诊断，以及及 时预防就成为了关键。 本文以建立 EV71 病毒酶联免疫吸附（ELISA）检测体系并应用于临床研 究为目的。主要内容包括免疫原的制备，单抗的制备、筛选和配对，双抗夹心 法体系和间接法体系建立、优化以及性能验证等几个部分。我们首先制备了免 疫原，对 BALB/C 雌性小鼠进行了免疫，通过杂交瘤筛选技术得到 4 株能分泌 单抗的细胞株，并采用了腹腔注射杂交瘤的方法得到大量高纯度的单抗。然后 建立了两种不同的 ELISA 检测体系：一种是定量检测 EV71 病毒的双抗夹心法 体系，另一种是定性检测抗 EV71 型病毒早期 IgM 的间接法体系，并对这两种 体系的包被量、包被液、酶标抗体、标准品等方面进行了优化。在最后对间接 法体系的性能进行了验证，并得到了较好的结果。本研究有望用于临床快速体 外检测 EV71 病毒患者感染病况。图 24 幅，表 20 个，参考文献 62 篇。 关键词：手足口病；肠道病毒 71 型；单抗；酶联免疫吸附测定 Abst Abstract Abstract Hand, foot, and mouth disease (HFMD) is a common viral ill-ness in infants and children. HFMD is caused by viruses that belong to the enterovirus genus of the picornavirus family which includes polioviruses, coxsackieviruses, echoviruses, and enteroviruses.Coxsackieviruses, especially coxsackievirus A16 (CA16), are the most common cause of HFMD. Other enteroviruses, especially enterovirus 71 (EV71), have also been associated with HFMD and may lead to outbreaks of the disease with severe mobility and mortaLity.HFMD usually begins with a fever, poor appetite, malaise, and often with a sore throat. Most HFMD infections do not result in serious complications;however, when the pathogen of HFMD is EV71, the disease can present with a high rate of neurological complications,including